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T25m2 人腎成纖維細(xì)胞提取物操作

參考價(jià)
面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)T25m2
  • 品牌
  • 所在地上海市
  • 更新時(shí)間2021-06-21
  • 廠商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商
  • 入駐年限9
  • 實(shí)名認(rèn)證已認(rèn)證
  • 產(chǎn)品數(shù)量9300
  • 人氣值287700
產(chǎn)品標(biāo)簽

人腎成纖維細(xì)胞提取物

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上海莼試生物技術(shù)有限公司Shanghai C-reagent Biotechnology  Co. Ltd.  專(zhuān)業(yè)服務(wù)于生命科學(xué)領(lǐng)域,擁有分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、化學(xué)等方面的科研技術(shù)團(tuán)隊(duì),經(jīng)營(yíng)科研生化試劑、分析試劑、實(shí)驗(yàn)耗材,推出技術(shù)先進(jìn)、質(zhì)量穩(wěn)定的科研產(chǎn)品。為全國(guó)乃至于世界各地科研機(jī)構(gòu)、工業(yè)、電子、醫(yī)療、科技等領(lǐng)域的客戶(hù),提供系統(tǒng)的產(chǎn)品資源及配套技術(shù)服務(wù)。推出十幾個(gè)種類(lèi)產(chǎn)品線,部分產(chǎn)品接受定制服務(wù)!



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人腎成纖維細(xì)胞提取物操作收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人腎成纖維細(xì)胞提取物操作 產(chǎn)品詳情

收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒(méi)有透氣孔的話(huà),瓶蓋不要擰太緊)
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

人腎成纖維細(xì)胞提取物【Human Renal : Normal Renal Fibroblast Derivatives】人腎成纖維細(xì)胞提取物是從人腎成纖維細(xì)胞提取的,人腎成纖維細(xì)胞從正常人腎組織制備。正常人腎組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mgRNA68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF-80度保存。

潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序;<4> Western and Northern Blot<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。

產(chǎn)品名稱(chēng)

人腎成纖維細(xì)胞提取物操作

規(guī)格

T25m2

貨號(hào)

CS-963980

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 
2
.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理; 
3
.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 
4
.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 
5
.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
3、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min
2PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min
3PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,375%CO2培養(yǎng)。
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CD53 Others Mouse 小鼠 CD53 (aa 107-181) 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Fmoc-纈氨醇 Fmoc-Valinol質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR

皮膚癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)/1mlL-賴(lài)氨酸鹽酸鹽H-Lys-OH.HCl質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR

GT1.1細(xì)胞,小鼠垂體瘤細(xì)胞(分泌促生長(zhǎng)激素分泌激素) 卵巢癌細(xì)胞系,Anglne細(xì)胞 骨骼肌細(xì)胞裂解物HSkMCLL-鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽L-Ornithine mono質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

恒河猴腎細(xì)胞;LLC-MK2L-天門(mén)冬氨酸L-Aspartic acid質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR

IFNW1 Others Human  Ierferon omega-1 / IFNω / IFNW1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) L-天門(mén)冬氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)L-Aspartic acid質(zhì)量規(guī)格:>99%(T),標(biāo)準(zhǔn)品
人腎成纖維細(xì)胞提取物操作恒河猴腎細(xì)胞;MMK3 Butt瘤細(xì)胞,EB-3[EB3]細(xì)胞 TE-11(食管癌細(xì)胞)(-)-鹽酸東莨菪堿(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.0%(−)-Scopolamine

急性早幼粒白血病細(xì)胞;HL-60十四烷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%(GC)Tetradecane

EFNA3 Others Human  EphrinA3 / EFNA3 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 苯駢三氮唑(BTA,1,2,3-苯駢三氮唑)質(zhì)量規(guī)格:AR,分析1H-Benzotriazole

CM-H004肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL鹽酸倍他司汀質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRBetahistine Di

SUSD4 Others Human  SUSD4 / Sushi domain-coaining 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸倍他司汀(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Betahistine Di

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