操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | BJ-X97360 |
商品屬性：
名稱 大鼠雪旺氏細(xì)胞 2.組織來(lái)源：神經(jīng)組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 大鼠雪旺氏細(xì)胞分離神經(jīng)組織；周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞稱施萬(wàn)（schwann，又名雪旺細(xì)胞）細(xì)胞，它沿神經(jīng)元的突起分布。施萬(wàn)細(xì)胞包裹在神經(jīng)纖維上，這種神經(jīng)纖維叫有髓神經(jīng)纖維。有髓神經(jīng)纖維和無(wú)髓神經(jīng)纖維的施萬(wàn)細(xì)胞的形態(tài)和功能有所差異，施萬(wàn)細(xì)胞的外表面有基膜，能分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，促進(jìn)受損的神經(jīng)元的存活及其軸突的再生，參與周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)纖維的構(gòu)成。施萬(wàn)細(xì)胞的胞核呈長(zhǎng)卵圓形，其長(zhǎng)軸與軸突平行，核周有少量胞質(zhì)。由于施萬(wàn)細(xì)胞包在軸突的外面，故又稱神經(jīng)膜細(xì)胞（neurilemmalcell），它的外面包有一層基膜。施萬(wàn)細(xì)胞最外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱神經(jīng)膜（neurilemma），光鏡下可見(jiàn)此膜。在有髓神經(jīng)纖維發(fā)生中，伴隨軸突一起生長(zhǎng)的施萬(wàn)細(xì)胞表面凹陷成一縱溝，軸突位于縱溝內(nèi)，溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜（mesaxon）。軸突系膜不斷伸長(zhǎng)并反復(fù)包卷軸突，把胞質(zhì)擠至細(xì)胞的內(nèi)、外邊緣及兩端（即靠近郎氏結(jié)處），從而形成許多同心圓的螺旋膜板層，即為髓鞘。故髓鞘乃成自施萬(wàn)細(xì)胞的胞膜，屬施萬(wàn)細(xì)胞的一部分。施萬(wàn)細(xì)胞的胞質(zhì)除見(jiàn)于細(xì)胞的外、內(nèi)邊緣和兩端外，還見(jiàn)于髓鞘板層內(nèi)的施－蘭切跡。該切跡構(gòu)成螺旋形的胞質(zhì)通道，并與細(xì)胞外、內(nèi)邊緣的胞質(zhì)相通。 5.方法簡(jiǎn)介： ()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠雪旺氏細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： ()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠雪旺氏細(xì)胞經(jīng)S-100免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R111 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)雙極、多極形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人抗眼肌抗體(EMAb)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
雞Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
驢雌二醇(E2)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
李氏菌增菌肉湯（LB1） 英文名稱：Listeria Enrichment Broth Base 產(chǎn)品規(guī)格：9ml*20支/包
葡萄糖胰蛋白胨瓊脂 英文名稱：Glucose Tryptone Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
金胺O染色液 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*6
小鼠硒蛋白M(SELM)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠肺表?
大鼠雪旺氏細(xì)胞Eurytrema coelomaticum腔闊盤(pán)吸蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CACH3/CaV1.3 L型鈣通道蛋白a1亞型3抗體 規(guī)格: 0.2ml
Radix glycyrrhizae甘草LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周MALT1 粘膜相關(guān)淋巴組織轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Allpaahuayo virus(ALLV)奧爾帕瓦約病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格: 0.1ml
Rhizoma corydalis元胡LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周ABCA7 三磷酸苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml
騾源性成分PCR檢測(cè)試劑盒 種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周GIRK1 G蛋白激活內(nèi)向鉀通道1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fructus piperis longi蓽茇染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周gremlin 骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Salmonella abortus ovis羊流產(chǎn)沙門(mén)氏LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CLCA4 鈣激活氯離子通道4抗體 規(guī)格: 0.1ml
Porcine herpesvirus豬皰疹病毒通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周BST2/CD317 骨髓基質(zhì)干細(xì)胞抗原2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Radix ephedrae麻黃根探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周phospho-Rb/p105-Rb(Ser780) 磷酸化成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤抑蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fowlpox Virus(FPV)雞痘病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周ED-1 外胚層發(fā)育不良抗體 規(guī)格: 0.1ml
