【儀表網(wǎng) 儀表文件】農(nóng)貿(mào)(集貿(mào))市場是新冠肺炎疫情防控的重點場所，為科學(xué)規(guī)范指導(dǎo)開展農(nóng)貿(mào)(集貿(mào))市場新冠病毒環(huán)境監(jiān)測工作，深入開展病毒溯源和疫情防控，國務(wù)院應(yīng)對新型冠狀病毒肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制綜合組組織編制了《農(nóng)貿(mào)(集貿(mào))市場新型冠狀病毒環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》(以下稱《規(guī)范》)。
 

　　《規(guī)范》內(nèi)容包括監(jiān)測對象、監(jiān)測內(nèi)容、樣本采樣、檢測等內(nèi)容，以及各環(huán)節(jié)注意事項，同時進一步明確了每一步的實驗步驟、防護措施及所需的儀器：比如核酸提取儀、實時熒光定量PCR、離心機、病毒采樣箱、病毒采樣管、氣溶膠采集器、樣品記錄單、手消設(shè)備、潔凈采樣袋、冰袋、高危險生物樣本轉(zhuǎn)運箱和生物安全垃圾袋等。
 

　　《農(nóng)貿(mào)(集貿(mào))市場新型冠狀病毒環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》

 

　　農(nóng)貿(mào)(集貿(mào))市場是新冠肺炎疫情防控的重點場所，加強對農(nóng)貿(mào)(集貿(mào))市場新冠病毒環(huán)境監(jiān)測，對于深入開展病毒溯源和疫情防控意義重大。為科學(xué)規(guī)范指導(dǎo)開展農(nóng)貿(mào)(集貿(mào))市場新冠病毒環(huán)境監(jiān)測工作，特制定本技術(shù)規(guī)范。
 

　　一、監(jiān)測對象
 

　　監(jiān)測重點為具備區(qū)域輻射能力的大型農(nóng)貿(mào)(集貿(mào))市場，特別是包括冷凍、冷藏功能的肉類和海鮮水產(chǎn)交易攤位，或者存在潮濕、密閉空間的市場。
 

　　二、監(jiān)測內(nèi)容
 

　　(一)市場內(nèi)重點攤位的設(shè)施、用具表面病毒檢測。重點對攤位臺面、面板、地面、把手，以及各種制作和使用器具等表面，包括脫毛或切割機械、刀具等，采集拭子樣本。
 

　　(二)市場內(nèi)重點攤位從業(yè)人員咽拭子、衣物表面、手部病毒檢測。對處于工作狀態(tài)的從業(yè)人員手部表面，采集拭子樣本。
 

　　(三)市場內(nèi)重點攤位存放食品的冰箱、冷藏柜內(nèi)部表面病毒檢測。對儲藏食物過程中經(jīng)常觸及的冰箱、冷藏柜內(nèi)表面，采集拭子樣本。
 

　　(四)市場內(nèi)銷售的肉、禽類和海鮮水產(chǎn)類食品的病毒檢測。對市場內(nèi)銷售的食品應(yīng)當按照無包裝食品和有包裝食品加以區(qū)分，其中有包裝類食品重點是需要冷藏運輸?shù)娜狻⑶蓊惡秃ｕr水產(chǎn)類食品，采集拭子樣本。
 

　　(五)市場內(nèi)排水系統(tǒng)中污水的病毒檢測。重點包括市場內(nèi)海鮮水產(chǎn)、肉禽類產(chǎn)品攤位來源的污水，采集拭子樣本或污水樣本。
 

　　(六)市場內(nèi)公共空間中人員接觸較多的部位，包括主要進出口的電梯按鈕、樓梯扶手、門把手表面，茶水間、衛(wèi)生間等公用設(shè)備設(shè)施表面，潮濕的公共通道和衛(wèi)生間地面、墩布池等采集拭子樣本。
 

　　(七)市場內(nèi)經(jīng)常性跨區(qū)域移動的工具或物品，包括垃圾車、垃圾桶、墩布等清潔工具，轉(zhuǎn)運物品的拖車等，采集拭子樣本。
 

　　(八)市場內(nèi)工作人員聚集、通風不良的環(huán)境，包括辦公室、工具間、休息間、局部交易環(huán)境等環(huán)境拭子及氣溶膠樣本。
 

　　三、樣本采樣
 

　　(一)樣本要求。
 

　　1.從業(yè)人員咽拭子、手部、衣物和其他物體表面拭子樣本：要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集的手部或物體(包括公共通道的地面)的表面重復(fù)涂抹、涮洗3次以上。同時要滿足對采樣對象表面，進行多點分布式采樣。
 

　　2.食品表面拭子樣本：食品樣本不可直接進行采集，應(yīng)當首先將擬采集的食品小心分離，并存放于潔凈采樣袋后，再進行拭子樣本的采集。要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集食物樣本的表面重復(fù)涂抹、涮洗3次以上。同時要滿足對樣本表面，進行多點分布式采樣。
 

　　3.污水樣本：按照市場內(nèi)排水系統(tǒng)分布情況，選取2-3處污水采樣位置，重點為內(nèi)部管網(wǎng)匯集處、水流方向的下游或與市政管網(wǎng)的連接處。采集拭子樣本要求，用采樣棉簽浸入污水中，使其吸附污水并在采樣管中對涮洗3次以上。采集污水樣本要求，用聚乙烯塑料瓶收集30-500mL污水水樣；大于500mL體積的污水采集可以使用聚乙烯塑料桶或現(xiàn)場水樣專用富集設(shè)備。同時要滿足對污水采樣位置，進行多點分布式采樣。
 

　　4.動物樣本：對于活體動物，可分別用采樣棉簽采集其體表拭子、口咽拭子和肛拭子，也可以采集其排泄物或分泌物樣本，并在記錄單上進行相應(yīng)記錄。對于以經(jīng)過剝皮等處理的動物樣本，分別用棉簽采集其體表和體腔拭子樣本，要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集食物樣本的表面重復(fù)涂抹、涮洗3次以上。同時要滿足對樣本表面，進行多點分布式采樣。
 

　　5.其他器具：籠具或魚缸等裝運、養(yǎng)殖動物的容器，需首先觀察或了解該容器具體存放、養(yǎng)殖過的動物類型，采集容器內(nèi)壁拭子樣本或內(nèi)容物液體樣本。
 

　　6.人員聚集、通風不良的局部交易區(qū)域、辦公室、休息間等環(huán)境采集氣溶膠樣本。
 

　　(二)采樣方法。
 

　　1.采樣周期：對重點大型集貿(mào)市場(特別是銷售生鮮類產(chǎn)品的市場)按照1次/周，對其余需要監(jiān)測的集貿(mào)市場按照1次/月的頻次進行病毒監(jiān)測。
 

　　2.采樣實施：現(xiàn)場采樣由兩名以上的工作人員參與完成，采樣時應(yīng)當穿戴防護服、防護口罩、鞋套和醫(yī)用一次性手套。采樣過程需開啟現(xiàn)場采樣視頻記錄設(shè)備。
 

　　3.采樣裝備：病毒采樣箱、病毒采樣管、氣溶膠采集器、樣品記錄單、手消設(shè)備、潔凈采樣袋、冰袋、高危險生物樣本轉(zhuǎn)運箱和生物安全垃圾袋等。
 

　　4.采樣記錄：樣本信息應(yīng)當包括樣本采集的采樣時間、地點、集貿(mào)市場名稱、攤位編號、采樣類型、樣本編號以及采樣人等信息。
 

　　5.采樣操作：采樣開始前，要求穿戴防護服、口罩、鞋套和手套等個人防護用品進入采樣現(xiàn)場，并使用手消進行手部消毒。拭子樣本采樣過程中，采樣棉簽只能接觸當前采集的樣本，避免觸碰到其他物體。污水樣本采集前，先充分攪勻，然后取樣。污水分三層以上，不能攪勻時，可按各層量的多少的比例分層取樣。氣溶膠樣本采集使用氣溶膠采集器，設(shè)定采集高度、空氣通量和采集時間，進行氣溶膠采集，將采集后的吸收液或濾膜放置在特定的低溫容器進行轉(zhuǎn)運。采樣結(jié)束后，清理廢棄物后離場。
 

　　6.樣品轉(zhuǎn)運：采集樣品連同采樣記錄單應(yīng)當在24小時內(nèi)運送至當?shù)刂付ǖ牟《颈O(jiān)測機構(gòu)進行檢測，樣本建議冷藏存放于高危險生物樣本轉(zhuǎn)運箱中，并由專人、專車進行轉(zhuǎn)運。
 

　　四、檢測
 

　　(一)樣本分裝和保存。
 

　　1.樣本分裝：標本采集后應(yīng)當在生物安全二級實驗室生物安全柜內(nèi)分裝，但個人防護裝備參照生物安全三級實驗室的防護要求。所有采集對環(huán)境標本應(yīng)當分裝到大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈、耐冷凍的樣本采集管里，按照1000ul/管進行分裝。容器(采集管)外注明樣本編號、種類及采樣日期。用于后續(xù)核酸提取和病毒分離等實驗室檢測工作。
 

　　2.樣本保存：用于病毒分離和核酸檢測的標本應(yīng)當盡快進行檢測，能在24小時內(nèi)檢測的標本可置于4℃保存；24小時內(nèi)無法檢測的標本則應(yīng)當置于-70℃或以下保存(如無-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存)。
 

　　(二)污水水樣前期處理。使用離心技術(shù)去除污水中雜質(zhì)。先打開低溫離心機，待溫度降至4℃左右，建議4654離心力離心30分鐘，取上清。再使用膜吸附技術(shù)或超濾技術(shù)進行上清液的濃縮。
 

　　(三)核酸提取。新型冠狀病毒的常規(guī)檢測方法是通過實時熒光RT-PCR鑒定。任何新型冠狀病毒的檢測都必須由經(jīng)過相關(guān)生物安全及技能培訓(xùn)的人員進行操作。對已經(jīng)滅活的樣本，應(yīng)當在生物安全二級(BSL-2)實驗室內(nèi)，使用自動化核酸提取儀，配套核酸提取試劑盒進行病毒核酸的提取。核酸提取后，應(yīng)當將核酸產(chǎn)物進行分裝，用于后續(xù)核酸實時熒光定量(RT-PCR)及深度測序。核酸提取操作參考相關(guān)廠家試劑盒說明書開展。
 

　　(四)實時熒光定量PCR。在BSL-2實驗室中對所有已提取的核酸樣本，應(yīng)當用經(jīng)CFDA批準的RT-PCR診斷試劑進行新型冠狀病毒核酸檢測，以保證實驗結(jié)果的正確可靠。RT-PCR反應(yīng)體系和操作參考相關(guān)廠家試劑盒說明。每一次RT-PCR反應(yīng)均應(yīng)當設(shè)置陰性對照、陽性對照和無模板空白對照，以確保擴增體系工作正常。
 

　　五、實驗室生物安全
 

　　實驗室安全級別參照新版《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南(第二版)》的相關(guān)內(nèi)容進行管理。采集的環(huán)境樣本屬于未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料，在采用可靠的方法滅活前進行的病毒抗原檢測、血清學(xué)檢測、核酸提取、生化分析，以及臨床樣本的滅活等操作，應(yīng)當在生物安全二級實驗室進行，同時采用生物安全三級實驗室的個人防護。環(huán)境樣本在采用可靠的方法滅活后進行的核酸檢測、抗原檢測、血清學(xué)檢測、生化分析等操作應(yīng)當在生物安全二級實驗室進行。
 

　　來源：國家衛(wèi)健委網(wǎng)站