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elisa檢測(cè)試劑盒
ATCC細(xì)胞
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PCR檢測(cè)試劑盒
溶液
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小鼠12-羥基二十烷四烯酸elisa檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)和操作流程

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小鼠12-羥基二十烷四烯酸elisa檢測(cè)試劑盒   注意事項(xiàng):
1.不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同,務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作,否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性.
2.若不同批號(hào)人ELISA試劑盒的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用,有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等情形。
3.反應(yīng)時(shí)間的誤差,做大量標(biāo)本時(shí),*孔和zui后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
4.臨界值附近標(biāo)本波動(dòng)為正常現(xiàn)象,任何試劑均不可避免??梢钥紤]將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。
5.加樣時(shí)樣品量誤差,對(duì)于陰或很陽(yáng)的標(biāo)本影響不大,但對(duì)閾值附近的標(biāo)本影響極大,建議校對(duì)加樣器。

小鼠12-羥基二十烷四烯酸elisa檢測(cè)試劑盒       操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。

 

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