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elisa試劑盒這樣操作結果才會更加的準確

時間:2019-3-1閱讀:135
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                                  elisa試劑盒這樣操作結果才會更加的準確
實驗步驟:

1、試劑準備:根據選擇的試劑盒準備好相關試劑。

2、樣品準備:血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織標本等。

3、試劑的配置

4、抗體包被:Coating Buffer: 稀釋成Coating Buffer (1×),根據產品說明書稀釋抗體,每孔加入100ul預稀釋的抗體,4°C過夜孵育(16-18h)。

5、使用前,將所有試劑充分混勻,避免產生泡沫。

6、根據實驗孔(空白和標準品)數量,確定所需的板條數目。樣品(含標準品)和空白都應做復孔。

7、加樣:100 μL/well 加入稀釋后的 Cytokine standard 至標準品孔,100 μL/well 加入樣

品至樣品孔,100 μL/well 加 Dilution buffer R (1×)入空白對照孔。

8、加檢測抗體:根據產品說明書加入 Biotinylated antibody 。 混勻后蓋上封板膜,室溫孵育。

9、洗板:扣去孔內液體,300 μL/well 加入 1×washing buffer;停留 1 分鐘后棄去孔內液體。重復 3 次,每一次在濾紙上扣干。

10、加酶:根據產品說明書加入稀釋好的酶,孵育。

11、洗板:重復步驟 5 。

12、顯色:100 μL/well 加入 TMB,室溫(18-25℃)避光孵育5-30分鐘之間,根據孔內顏色的深淺(深藍色)來判定終止反應。 通常顯色 10-20 分鐘可以達到很好的效果。

13、終止反應:迅速 100 μL/well 加入 Stop solution 終止反應。

14、讀板:終止后 10 分鐘內,用檢測波長(measurement wavelength)450 nm 讀值。推薦用雙波長即檢測波長(measurement wavelength)450 nm 、參考波長或校正波長(reference wavelength )610-630 nm 同時讀板,測量結果會更準確。
 

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