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豚鼠一氧化氮elisa試劑盒的操作步驟

時間:2018/12/26閱讀:327
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豚鼠一氧化氮elisa試劑盒   操作步驟:

1、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

2、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

3、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

4、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此

重復(fù)5次,拍干。

5、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

6、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘.

7、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

8、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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