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ELISA試驗包被各條件選擇介紹

時間:2023/5/23閱讀:471
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1.包被抗原的選擇

包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。 天然蛋白需經純化才能用直接吸附法包被,對于含雜質較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應的物質如抗體直接吸附在酶標板上,再通過特 異性反應使抗原固相化)。經純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物,由于分子量太小,往往難于直接吸附在酶標板 上,一般都先使其與無關蛋白質如BSA等偶聯,偶聯物吸附于固相載體上。

2.包被液的選擇

一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,如果包被的抗原在堿性條件下不穩定的話,也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。

3.包被溫度的選擇

通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時,我們強烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的保持。

4. 包被濃度的選擇

包被的適濃度隨固相載體和包被物的性質變化,一般蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml,要明確針對特定包被抗原的適包被濃度需要通過實驗來確定。包板后需要封閉嗎?應該選擇什么樣的封閉體系?封閉是否必要,取決于ELISA的模式及具體的實驗條件。一般說來,雙抗體夾心法,只要酶標記物 是高活性的,操作時洗滌徹di,不經封閉也可得到滿意的結果。而在間接法測定中,封閉一般是必須的。常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、 10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉,AbMART推薦使用5%脫脂奶粉,價廉而且封閉能力強,不過5%脫脂奶粉只適合短期內使用,不宜長期保 存,所以ELISA試劑盒中較少使用。


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