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多胺氧化酶(PAO)測(cè)試盒比色法活性計(jì)算

時(shí)間:2023/10/17閱讀:483
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測(cè)定原理:

PAO催化多胺氧化產(chǎn)生過氧化氫,在過氧化物酶存在的條件下與底物顯色,在550nm下有特征吸收峰,通過測(cè)定吸光值增加速率來反映PAO活性。


PAO活性計(jì)算:

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A550變化0.001為一個(gè)酶活力單位。

PAO(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.001÷T =333.33×ΔA÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算:

單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A550變化0.001為一個(gè)酶活力單位。

PAO(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.001÷T =333.33×ΔA÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A550變化0.001為一個(gè)酶活力單位。

PAO(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.001÷T =0.667×ΔA

  1. 按液體體積計(jì)算

單位的定義:每mL液體樣本在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A550變化0.001為一個(gè)酶活力單位。

PAO(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.001÷T =333.33×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.02 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。


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