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ELISA酶聯免疫吸附實驗常見類型特點

時間:2024/10/14閱讀:326
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     ELISA實驗就是酶聯免疫吸附實驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)是將抗原或抗體結合在固相載體表面,利用抗原抗體的特異性結合以及抗體或者抗原上標記的酶催化特定底物發生顯色反應,實現目標物檢測的免疫分析方法,可測至皮摩爾(pmol)級別。

ELISA常見類型:

直接法:

將抗原按一定的比例稀釋好包被到固相載體上,然后加入稀釋好的特異性的酶標抗體,孵育后加入底物顯色并判讀結果。

特點:

適用于檢測小分子抗原,優勢:實驗步驟少,檢測速度快,無須使用二抗可避免交互反應,結果較準確。缺點:每種靶蛋白都需要準備能夠與其特異性結合的一抗,實驗靈活性低,靈敏度低。

間接法:

將已知抗原連接在固相載體上,待測抗體與抗原結合后再與酶標二抗結合,形成抗原一待測抗體-酶標二抗的復合物,復合物的形成量與待測抗體量成正比,屬非競爭性反應類型。

特點:

常用于抗體的檢測,只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標抗體檢測各種與抗原相應的抗體。優勢:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它多的免疫反應性。缺點:可能會發生交叉反應,與直接法比,實驗周期長。

夾心法:

類型:分為直接夾心和間接夾心。檢測抗體是酶標抗體,則可稱為直接夾心ELISA;檢測抗體不帶有標記,則還需要使用酶標二抗與檢測抗體結合,這種稱為間接夾心ELISA。

直接夾心又分為雙抗體夾心和雙抗原夾心。夾心ELISA實驗需要用到配對抗體(捕獲抗體和檢測抗體),原理:將捕獲抗體結合到ELISA板上,通過捕獲抗體固定抗原,隨后通過直接或間接ELISA的方式進行檢測。在夾心ELISA實驗中,最重要的是對配對抗體進行驗證,確保配對抗體能同時與抗原結合,以確保實驗的順利進行。

特點:

常用于抗原測定,適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,不適用于測定半抗原及小分子單價抗原。優點:高靈敏、高專一性,抗原無須事先純化。缺點:抗原一定得擁有兩個以上的抗體結合部位。

競爭法:

首先將特異性抗體吸附于固相載體表面,經洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液;而另一組只加酶標記抗原,再經孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測定的未知抗原的量。這種方法所測定的抗原只要有一個結合部位即可。

特點:

常測定小分子抗原:如激素和藥物之類,也可以用來檢測大分子抗原物質甚至是抗體。檢測大分子抗原物質時,由于空間位阻的影響,使得該檢測方法沒有雙抗體夾心法檢測大分子抗原物質靈敏度高。優勢:可適用不純的樣本,快速高效。 缺點:整體的敏感性和專一性都較差。


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