IL-11elisa試劑盒
1、 樣品的采集樣品為山東芝麻香型白酒酒醅。芝麻香型白酒釀造分為堆積發酵和窖池發酵兩個發酵階段，跟蹤采集了芝麻香型白酒釀造過程中堆積發酵和窖池發酵過程中的酒醅。選擇 I、II 兩個班組堆積酒醅作為平行樣品進行跟蹤取樣，不同取樣位置取 50 g 左右酒醅混合成一個樣品。堆積發酵周期為 18 h，每隔 6 h 取一次樣品，取樣時間分別為 0、6、12、 18 h。窖池發酵周期為 50 d，取樣時間分別為 3、5、 10、15、20、25、30、35、40、50 d。將采集的酒醅樣品密封，−80 °C 保存。
2、 主要試劑和儀器磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、10 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0)、、10% SDS、乙酸鈉、、乙醇購自國藥集團化學試劑(北京)有限公司；溶液、2SG Fast qPCR Master Mix (High Rox)購自生工生物工程(上海)股份有限公司。冷凍離心機，Beckman Coulter 公司；MiniBeadbeater 細胞破碎儀，Biospec 公司；Genius 3 旋渦振蕩器，IKA 公司；真空干燥箱，上海一恒科技有限公司；NanoDrop 8000 蛋白核酸測定分光光度計、熒光定量 qPCR，Thermo Fisher Scientific 公司。
3、 DNA 的提取、PCR 擴增及測序準確稱取 7 g 酒醅，加入 20 mL 無菌的 PBS 緩沖液(0.042 3 mol/L 磷酸二氫鈉，0.057 7 mol/L 磷酸氫二鈉)懸浮，漩渦振蕩，300×g 離心 5 min，收集上清液。將上清液 10 000×g 離心 15 min 收集細胞沉淀。DNA 的提取參考 Wang 等的方法。采用適用于大多數細菌的 16S rRNA 基因 V3−V4 區通用引物 338F (5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′) 和 806R (5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)。 PCR 擴增體系(20 μL)：5×FastPfu 緩沖液 4 μL， 2.5 mmol/L dNTPs 2 μL，5 μmol/L 上、下游引物各 0.8 μL，FastPfu 聚合酶 0.4 μL，樣品基因組模板 DNA 10 ng，超純水補足至 20 μL。PCR 反應條件： 95 °C 3 min；95 °C 30 s，55 °C 30 s，72 °C 45 s，共 27 個循環；72 °C 10 min。將 PCR 產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析，對 DNA 條帶進行切膠純化回收。純化后的 PCR 產物進行定量，根據定量結果混合不同樣品的 PCR 產物。構建 MiSeq 文庫，使用 Illumina MiSeq PE300 測序平臺測序。通過 QIIME (v1.8.0)和 Mothur 對測序結果分析處理，去掉質量不好的序列、長度小于 150 bp 的序列及含嵌合體的序列，并將相似度大于 97%的序列聚類為一個操作分類單元 OTU (Operational taxonomic unit)。計算 Shannon 指數(反映樣品的多樣性程度) 和 Chao1 指數(反映樣品中群落豐富度)，評估樣品微生物多樣性。利用在線比對引擎 BLAST 將 OTU 的代表序列在美國國家生物技術信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)上與 GenBank 數據庫中的序列進行比對，獲得 OTU 的物種信息。