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貨號	FS-X10693

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：ALK激酶抑制劑(CH5424802鹽酸鹽)

英文名稱：CH5424802 Hydrochloride

產品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10693

產品介紹:

CH5424802鹽酸鹽是ALK激酶高效抑制劑，IC50值為1.9nM，對ALK突變型L1196M也敏感。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1256589-74-8

別名：Alectinib Hydrochloride;AF-802 Hydrochloride;RG-7853 Hydrochloride;RO-5424802 Hydrochloride

純度：99.81%

分子量：519.08

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

間型腐霉磷化鈣介質抗原Anti-CAPN11 AntibodySnurportin1蛋白(SNUPN1)

羊泰勒蟲（張家川株-2）神經激肽A受體（多肽抗原）Anti-CAPN12 AntibodySnail同源物1(SNAI1)

大豆慢生根瘤菌鈣蛋白（多肽）Anti-CARD10 AntibodySmoothened蛋白(SMO)

秦氏蜜環(huán)菌炎癥負調控因子蛋白（抗原）Anti-CAPN9 AntibodySmoothelin蛋白(SMTN)

豌豆根瘤菌微管相關蛋白（抗原）Anti-CARD8 AntibodySmad同源物7(Smad7)

霍利斯格里蒙菌端粒（催化亞單位）（多肽抗原）Anti-CARD19 AntibodySmad同源物4(Smad4)

宇佐美曲霉轉移生長因子–α（抗原）Anti-CARF AntibodySmad同源物3(Smad3)

掌狀花耳鈣/鈣調依賴蛋白激2α抗原Anti-CARF AntibodySmad同源物1(Smad1)

微小桿菌鈣/鈣調蛋白依賴蛋白激IG抗原Anti-CARM1 AntibodySlit同源物3(Slit3)

委內瑞拉鏈霉菌轉移生長因子–β1（抗原）Anti-P4 AntibodySlit同源物2(Slit2)

節(jié)桿菌屬鈣/鈣調依賴蛋白激2b抗原Anti-P5 AntibodySlit同源物1(Slit1)

環(huán)狀芽胞桿菌Park7/DJ-1/CAP1抗原Anti-P7 AntibodySlingshot同源物3(SSH3)

稻平臍孺孢環(huán)化相關蛋白CAP-2抗原Anti-Z1 AntibodySlingshot同源物2(SSH2)

生脂固氮螺菌轉移生長因子–β2前體肽Anti-CAVIN3 AntibodySlingshot同源物1(SSH1)

枯草芽孢桿菌轉移生長因子–β3（抗原）Anti-P9 AntibodySideroflexin5蛋白(SFXN5)

植物乳桿菌植物亞種轉移生長因子β受體2（多肽抗原）Anti-CBFA2T3 AntibodySideroflexin4蛋白(SFXN4)

PGBD3蛋白抗體Phaeobacterinhibens人成神經細胞瘤（來自骨髓）

蛋白激Cα相互作用蛋白1抗體Fulvimarinapelagi大鼠肝癌細胞

絲/蘇蛋白激5抗體Aurantimonascoralicida人視網膜內皮細胞

蛋白質磷1G抗體PP2CγPsychrobacillusinsolitus小鼠腦微血管內皮細胞
ALK激酶抑制劑(CH5424802鹽酸鹽)大腸桿 4--3-活化

真姬菇 3-苯堿性磷

紫色鏈霉吡咯-2-甲銅藍蛋白

費希爾曲霉 2--4-甲基喹啉布病抗體

產氣莢膜梭 A型 1,2,3-氧基苯雷帕霉靶蛋白

蕓薹生鏈格孢 2--5-甲碳酐2

皺褶青霉甲基三辛基化(R=C8-C10)硫代反應物

耐多抗諾卡氏鉍試劑II葡萄糖-6-磷脫氫

長孢洛德酵母 2,3-二苯甲線粒體肌激1A

卷枝毛霉卷枝變型四甲基脲碳酐2

安大略假絲酵母四基化甘油-3-磷酰基轉移

泡盛曲霉甲脒鹽鹽γ球蛋白

阿爾通山堿線 (S)-2-(甲氧甲基)吡咯烷誘導型NO合

膠孢 (S)-(-)-2-(甲氧甲基)-1-吡咯烷甲環(huán)加氧2

食吡啶紅球鈉亞洲 I 型口蹄疫病
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)