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分光光度計的測量方法

閱讀:1278        發布時間:2015/7/4
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分光光度計的測量方法主要有以下幾種方法

Lowry 法:以zui早期的 Biuret 反應為基礎,并有所改進。蛋白質與Cu2+反應,產生藍色的反應物。但是與 Biuret相比,Lowry 法敏感性。缺點是需要順序加入幾種不同的反應試劑;反應需要的時間較長;容易受到非蛋白物質的影響;含EDTA,Triton x-100,ammonia sulfate 等物質的蛋白不適合此種方法。
BCA(Bicinchoninine acid assay)法:這是一種較新的、敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2+反應產生 Cu+,后者與 BCA 形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在 562 nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關系*,反應后形成的化合物非常穩定。相對于 Lowry 法,操作簡單,敏感度。但是與 Lowry法相似的是容易受到蛋白質之間以及去污劑的干擾。
Bradford 法:這種方法的原理是蛋白質與考馬斯亮蘭結合反應,產生的有色化合物吸收峰595 nm。其zui大的特點是,敏感度好,是 Lowry 和 BCA 兩種測試方法的 2倍;操作簡單,速度快;只需要一種反應試劑;化合物可以穩定1小時,方便結果;而且與一系列干擾 Lowry,BCA 反應的還原劑(如DTT,巰基乙醇)相容。但是對于去污劑依然是敏感的。zui主要的缺點是不同的品會導致同一樣品的結果差異較大,無可比性。
某些初次接觸比色法測定的研究者可能為比色法測出的結果并不一致,感到迷惑,究竟該相信哪種方法?由于方法反應的基團以及顯色基團不一,所以同時使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。例如:Keller 等測試人奶中的蛋白,結果 Lowry,BCA測出的濃度明顯于Bradford,差異顯著。即使是測定同一樣品,同一種比色法選擇的樣品不一致,測試后的濃度也不一致。

水分測定儀,哈爾濱宇達電子技術有限公司。

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