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ELISA試劑盒檢測沙眼衣原體抗體的方法

時間:2013/8/27閱讀:355
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沙眼衣原體有3個生物學變種,其中2個與人類疾病有關,引起沙眼及包涵體結膜炎。沙眼是世界范圍流行的眼病,是致盲的重要原因。此外,沙眼衣原體、人型支原體、解脲脲原體是引起人類泌尿生殖系統感染的重要病原體,尤以沙眼衣原體更重要。常用檢查方法有ELISA試劑盒和生物芯片法檢測沙眼衣原體抗體。
方法學原理:在已包被沙眼衣原體抗原的微孔板孑L內,加入待測血清和HRP-抗人Ig,再加入酶底物顯色。根據顯色強度可判定沙眼衣原體抗體的有無及水平。
    [試劑]
    1.預包被微孔板
    2.洗滌液
    3.HRP-抗人IgG
    4.陰性對照、陽性對照
    5.底物液
    6.終止液
    [儀器]  酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。
    [ELISA試劑盒檢測步驟]
    1.從試劑盒中取出已包被沙眼衣原體抗原的微孔板和所有試劑,預溫至室溫。
    2.將待檢血清、校準血清、陰性和陽性質控血清用稀釋液作1:20稀釋。分別加至相應的微孔內,每孔100u1。空白孔加稀釋劑100ul。
    3.室溫環境中溫育20min后用洗滌液洗3次,每次洗滌量250ul。
    4.各孔分別加HRP-抗人IgGl00~1,室溫環境中溫育20min,同上法洗滌3次。
    5.各孔加底物溶液100rtl,室溫環境中溫育10min顯色,每孔加終止液100gl終止反應。
    6.在酶聯免疫測定儀上測定450nm波長的吸光度。
   [結果判斷]
    1.將吸光度用下列公式換算成ISR值:
ISR=樣品的吸光度÷(校準物的平均吸光度×校正因子)
(校正因子在校準血清的標簽上)
    2.待測血清ISR值≤0.9為陰性。
    3.待測血清ISR值為0.91一1. 09為可疑陽性,應重新檢測或隨診。
    4.待測血清ISR值≥1.10為陽性。
    [注意事項]
    1.每次試驗均須設置陽性與陰性質控血清和校準血清測定孔。
    2.用450nm波長,試劑空白的吸光度必須<0.15;陰性質控血清的吸光度必須<0.25;陽性質控血清的吸光度必須≥0.50;校準血清的吸光度必須≥0.25。
[ELISA試劑盒正常參考值]  沙眼衣原體抗體陰性。

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