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臨床檢驗(yàn)中ABS-ELISA試劑盒應(yīng)用不多

時(shí)間:2014/4/8閱讀:1526
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       IgM抗體的檢測(cè)用于傳染病的早期診斷中。間接法ELISA試劑盒一般僅適用于檢測(cè)總抗體或IgG抗體。如用抗原包被的間接法直接測(cè)定IgM抗體,因標(biāo)本中一般同時(shí)存在較高濃度的IgG抗體,后者將競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗原而使一部份IgM抗體不能結(jié)合到固相上。因此如用抗人IgM作為二抗,間接測(cè)定IgM抗體,必須先將標(biāo)本用A蛋白或抗IgG抗體處理,以除去IgG的干擾。在臨床檢驗(yàn)中測(cè)定抗體IgM時(shí)多采用捕獲包被法。先用抗人IgM抗體包被固相,以捕獲血清標(biāo)本中的IgM(其中包括針對(duì)抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM)。然后加入抗原,此抗原僅與特異性IgM相結(jié)合。繼而加酶標(biāo)記針對(duì)抗原的特異性抗體。再與底物作用,呈色即與標(biāo)本中的IgM成正相關(guān)。此法常用于病毒性感染的早期診斷。甲型肝炎病毒(HAV)抗體的檢測(cè)模式見圖2-7。

      類風(fēng)濕因子(RF)同樣能干擾捕獲包被法測(cè)定IgM抗體,導(dǎo)致假陽性反應(yīng)。因此中和IgG的間接法近來頗受青睞,用這類試劑檢測(cè)抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。

      2.2.7 ABS-ELISA試劑盒法

      ABS為親和素(avidin)*(biotin)系統(tǒng)(system)的略語。親和素是一種糖蛋白,分子量60000,每個(gè)分子由4個(gè)能和*結(jié)合的亞基組成。*為小分子化合物,分子量244。用化學(xué)方法制成的衍*-羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質(zhì)和糖等多種類型的大小分子形成*標(biāo)記產(chǎn)物,標(biāo)記方法頗為簡(jiǎn)便。*與親和素的結(jié)合具有很強(qiáng)的特異性,其親和力較抗原抗體反應(yīng)大得多,兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于一個(gè)親和素可與4個(gè)*分子結(jié)合,因此如把ABS與ELISA試劑盒法可分為酶標(biāo)記親和素-*(LAB)法和橋聯(lián)親和素-*(ABC)法兩種類型。兩者均以*標(biāo)記的抗體(或抗原)代替原人ELISA試劑盒系統(tǒng)中的酶標(biāo)抗體(抗原)。在LAB中,固相*先與不標(biāo)記的親和素反應(yīng),然后再加酶標(biāo)記的*以進(jìn)一步提高敏感度。在早期,親和素從蛋清中提取,這種卵親和素為堿性糖蛋白,與聚苯乙烯載體的吸附性很強(qiáng),用于ELISA中可使本底增高。從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素則無此缺點(diǎn),在ELISA試劑盒應(yīng)用中有替代前者的趨勢(shì)。由于ABS-ELISA試劑盒較普通ELISA試劑盒多用了兩種試劑,增加了操作步驟。

      

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