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ELISA試劑盒的抗原的結(jié)合

時(shí)間:2014/4/21閱讀:363
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    在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。

    ELISA試劑盒屬固相免疫測(cè)定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標(biāo)本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì),只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育。

    溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA試劑盒方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗(yàn)表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1~2小時(shí),產(chǎn)物的生成可達(dá)。為加速反應(yīng),可提高反應(yīng)的溫度,有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,但不宜采用更高的溫度??乖贵w反應(yīng)4℃更為*,在放射免疫測(cè)定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜,以形成zui多的沉淀。但因所需時(shí)間太長(zhǎng),在ELISA試劑盒中一般不予采用。

    保溫的方式除有的ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中,ELISA試劑盒板底應(yīng)貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度,特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此。無論是水浴還是濕盒溫育,反應(yīng)板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng),操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20~25℃,但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時(shí),ELISA試劑盒只要平置于操作臺(tái)上即可。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。為保證這一點(diǎn),一個(gè)人操作時(shí),一次不宜多于兩塊板同時(shí)測(cè)定。

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