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人白血病抑制因子試劑盒使用說(shuō)明書

時(shí)間:2015/6/1閱讀:377
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人白血病抑制因子試劑盒原理
    本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 LIF 單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 LIF與單抗結(jié)合,加入*化的抗人LIF,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與*結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,zui后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)OD值,LIF濃度與OD值成正比,可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中LIF濃度。       試劑盒組成(2-8℃保存)  
酶標(biāo)板(Coated Wells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(Enzyme Conjugate)12ml
10×標(biāo)本稀釋液(Sample Buffer)12ml20×濃縮洗滌液(Wash Buffer)50ml
標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):40ng/瓶2瓶底物工作液(TMB Solution)12ml
*抗體工作液(Biotinylated Antibody)12ml終止液(Stop Solution)12ml
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成40ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,*管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在*管中加入40ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。
3. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
檢測(cè)程序
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。
人白血病抑制因子試劑盒結(jié)果計(jì)算與判斷
1. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)LIF含量。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的LIF 檢測(cè)濃度小于30pg/ml。
2. 特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人LIF。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。
人白血病抑制因子試劑盒注意事項(xiàng)
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。
3. 板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!        


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