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ELISA試劑盒的相關技術參數

時間:2015/9/18閱讀:263
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   科學實驗講求重復性,一般ELISA試劑盒,其板內和板間變異系數應該控制在15%以內。在選擇ELISA試劑盒時,要通過閱讀相應的說明書或咨詢廠家試劑盒。ELISA試劑盒試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其ELISA試劑盒穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測??乖贵w的結合實質上只發生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間。由于兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系,所以抗原抗體反應具有高度的特異性。例如乙肝病毒中的表面抗原( HBsAg)、e抗原(HBeAg)和核心抗體(HBcAg),隨來源于同一病毒,但僅與其相應的抗體結合,而不與另外兩種抗體反應??乖贵w反應的這種特異性使免疫測定能在一非常復雜的蛋白質化合物(例如血清)中測定某一特定的物質ELISA試劑盒而不需先分離待檢物。
    但是這種特異性也不是的。假使兩種化合物有著部分相同的結構,在抗原抗體反應中可出現交叉反應。例如:絨毛膜*(hCG)和黃體生成激素(LH)均由α和β兩個亞單位組成,其結構的不同處在β亞單位,而兩者的α亞單位是同類的。用hCG免疫動物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩種抗體,抗α-hCG抗體將與LH中的
α酶位發生交叉反應。在臨床檢驗中,如用抗hCG抗血清作為妊娠診斷試劑檢定尿液中hCG,只能用于hCG濃度較高的試驗,否則婦女生理性排泄入尿液中的微量LH將與之發生交叉反應。因此在作為早孕診斷(敏感度應達到50mIu/mlhCG)的實際中必須應用只對hCG特異的抗β-hCG,以避免與其它激素的交叉反應的發生。
1.3.4 敏感性
    在測定血清中某一物質的含量時,化學比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應測定法的敏感度約為5~10μg/ml,免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應法相仿。標記的免疫測定的敏感度可提高數千倍,達ng/ml水平。例如,用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg,其敏感度可達0.1ng /ml。
1.4 免疫測定在臨床檢驗中的應用
    由于各種抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應的抗原,因此免疫測定的應用范圍極廣,在臨床檢驗中可用于測定:
1) 體液中的各種蛋白質,包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等。
2) 激素,ELISA試劑盒包括小分子量的甾體激素等。
3) 抗生素和藥物。
4) 病原體抗原,HBsAg、HBeAg等。
5) 另外,也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體,例如抗-HBs等。
5.標記的免疫測定

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