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96T人CXC趨化因子配體10ELISA 檢測(cè)試劑盒的準(zhǔn)備

時(shí)間:2013/4/1閱讀:343
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人CXC趨化因子配體10ELISA 檢測(cè)試劑盒

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿

試驗(yàn)原理:
    CXCL-10試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知CXCL-10濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將CXCL-10和*標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中CXCL-10的濃度呈比例關(guān)系。
 

人CXC趨化因子配體10ELISA 檢測(cè)試劑盒

    
操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 

人CXC趨化因子配體10ELISA 檢測(cè)試劑盒


操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
 
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人CXC趨化因子配體10ELISA 檢測(cè)試劑盒

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的CXCL-10標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的CXCL-10含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測(cè)值范圍:0-800pg/ml

4、敏感度: 1.0 pg/ml
Tau protein 微管相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
phospho-Tau protein (pThr489) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
phospho-Tau protein (pThr489) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
MAP-2(microtubule associated protein 2) 微管相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A) 微管相關(guān)蛋白1A抗體 0.1ml
Rabbit anti-human IgA/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人IgA 0.1ml
Rabbit anti-monkey IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗猴IgG 0.1ml
Rabbit anti-monkey IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗猴IgM 0.1ml
MAP1A/Mtap1a(microtubule associated protein 1A) 微管相關(guān)蛋白1A抗體 0.2ml
TBX2/T-box2(T-box Protein 2) 新型抑癌基因抗體(一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因) 0.2ml
TCF7L2/TCF-4(T-cell-specific transcription factor 4) 轉(zhuǎn)錄因子7類似物2抗體 0.2ml
TDP-43/TARDBP (tar DNA binding protein) Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗體 0.1ml
TDP-43/TARDBP (tar DNA binding protein) Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗體 0.2ml
PHLDA1/TDAG51(Pleckstrin homology-like domain family A member 1) T淋巴細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白TDAG51抗體 0.2ml
TEM 1/CD248(Tumor endothelial marker 1 precursor) 內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液酸蛋白抗體 0.2ml
Rabbit anti-mouse IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗小鼠IgM 0.1ml
Rabbit anti-mouse IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗小鼠IgM 1ml
Rabbit anti-pig IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗豬IgG 0.1ml
Rabbit anti-pig IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗豬IgG 1ml
 

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