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小鼠ELISA試劑盒,人A組輪狀病毒ELISA檢測試劑盒技術原理

時間:2013-10-29閱讀:211
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小鼠ELISA試劑盒試驗原理:

   Rotavirus試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知Rotavirus濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Rotavirus和*標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Rotavirus的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制:
試劑盒成份
96孔配置
48孔配置

96/48人份酶標板
1塊板(96T)
半塊(48T)

塑料膜板蓋
1塊
半塊

標準品:8.0IU/ml
1瓶(1.0ml)
1瓶(0.5ml)

空白對照
1瓶(1.0ml)
1瓶(0.5ml)

標準品稀釋緩沖液
1瓶(8.0ml)
1瓶(4.0ml)

*標記的抗Rotavirus抗體
1瓶(8.0ml)
1瓶(4.0ml)

親和鏈酶素-HRP
1瓶(12ml)
1瓶(6.0ml)

洗滌緩沖液
1瓶(20ml)
1瓶(10ml)

底物A
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)

底物B
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)

終止液
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)


自備材料:

蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

小鼠ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法:

血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

 

血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作注意事項:

試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。


操作步驟:

使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

小鼠ELISA試劑盒結 果 判 斷 與 分 析:

1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的Rotavirus標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的Rotavirus含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度, 再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
3、檢測值范圍:0-8.0IU/ml
4、敏感度: 0.01 IU/ml

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