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細(xì)菌生化鑒定管
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雞傳染性喉炎抗原酶聯(lián)免疫分析僅供研究使用

時(shí)間:2015-6-15閱讀:184
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使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中傳染性喉炎抗原(ILT-Ag)表達(dá)。
雞傳染性喉炎抗原酶聯(lián)免疫分析實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞傳染性喉炎抗原(ILT-Ag)表達(dá)。用純化的傳染性喉炎抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中傳染性喉炎抗原(ILT-Ag)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的傳染性喉炎抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中雞傳染性喉炎抗原(ILT-Ag)的存在與否。

試劑盒組成 
1    30倍濃縮洗滌液    20ml×1瓶    7    終止液    6ml×1瓶
2    酶標(biāo)試劑    6ml×1瓶    8    陽(yáng)性對(duì)照    0.5ml×1瓶
3    酶標(biāo)包被板    12孔×8條    9    陰性對(duì)照    0.5ml×1瓶
4    樣品稀釋液    6ml×1瓶    10    說(shuō)明書(shū)    1份
5    顯色劑A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2張  
6    顯色劑B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1個(gè)
標(biāo)本要求 
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
雞傳染性喉炎抗原酶聯(lián)免疫分析操作步驟
1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
計(jì)算和結(jié)果判定:

  試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
  臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
  陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為傳染性喉炎抗原(ILT-Ag)陰性
  陽(yáng)性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為傳染性喉炎抗原(ILT-Ag)陽(yáng)性
。 
雞傳染性喉炎抗原酶聯(lián)免疫分析注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月

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