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關于ELISA試劑盒質量管理--儀器質控研究

時間:2015-5-27閱讀:264
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    為使儀器保持*工作狀態應建立維護和校正儀器的標準操作程序(SOP),所要控制的儀器包括移液器(加樣槍),水浴箱(溫箱),洗板機和酶標儀。
    ◎移液器:ELISA加樣量小(5-100ul),其準確性直接影響實驗結果,利用稱重法檢查:吸取刻度指示量的水,萬分之一天平稱重后計算吸量是否準確,一般應在±10%以內;
◎水浴箱 經常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中(或溫箱內)實測溫度是否一致,ELISA試劑盒允許有±1℃的誤差;
    ◎洗板機 每個廠家設置洗板后的殘留液有各自的規定一般不超過2ul ,人工扣板時,墊紙不濕,定期檢查管孔是否堵塞;
◎酶標儀 經常維護其光學部分,防止濾光片霉變,ELISA試劑盒定期檢測校正,使其保持良好的工作性能。

附1:酶標儀校正程序
◎濾光片波長精度檢查:將不同波長的濾光片從酶標儀上卸下,用UV-2201型紫外-可見分光光度計(波長精度±0.3nm)于可見光區對每個濾光片進行掃描,其檢測值與標定值之差為濾光片波長精度。
◎通噵差與孔間差檢測:通道差檢測是取一只酶標板小孔杯(杯底須光滑,透明,無污染以酶標板架作載體, 將其(內含200ul甲基橙溶液吸光度調至0.500A左右)置于8個通道的相應位置,蒸溜水調零,1于490nm處連續測三次,觀察其不同通道的檢測器測量結果的一致性,可用極差值來表示。孔間差的測量是選擇同一廠家,同一批號酶標2板條(8條共96孔)分別加入200ul甲基橙溶液(吸光度調至0.100A左右)先后置于同一通道,蒸溜水調零,于490nm處檢測,其誤差大小用±1.96s衡量。
n 零點飄移(穩定性觀察):取8只小孔杯分別置于8個通道的相應位置,均加入200ul蒸溜水并調零,于490nm處每隔30分鐘測一次,觀察各個通道4小時內吸光度的變化。

◎精密度評價:每個通道3只小杯分別加入200ul高中低3種不同.濃度的甲基橙溶解,蒸溜水調零,于490nm作雙份平行測定,每日測二次(上下午各一次),連續測定20天。分別計算其批內精密度,日內批精密度,日間精密度和總精密度及相應的CV值。
◎線性測定:用電子天平稱取甲基橙配制5個系列的溶液,于490nm平行測8次,取其均值。計算其回歸方程,相關系數及標準估計誤差s,并用±1.96s表示樣品測量的誤差范圍.ELISA試劑盒雙波長測定評價:取一分甲基橙溶液,分別加入3種不同濃度的溶血液(測定波長為490nm,校正波長為585nm),先后于8個通道檢測,每個通道測3次,比較各組之間是否具有統計學差異,以考察雙波長消除干擾組分的效果。
◎一般酶標儀無585nm濾光片,可選用550nm或630nm濾光片。450nm 濾光片的檢定選用普魯蘭溶液(校正波長為630nm)。

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