网红主播精品视频在线观看_草久在线播放_免费人成在线观看成人片_国产高清乱子精品偷伦对白_国产无遮挡色视频免费观看性色_亚洲精品色婷婷在线影院

上海酶聯生物耗材有限公司
免費會員
ELISA試劑盒
ELISA試劑盒代測
免疫組化試劑盒代測
ATCC細胞株
sigma試劑
金標試劑盒
細胞株
病理耗材
干燥培養基(Dehydrated Culture Media)
食品科研檢測試劑
動物血清
細菌生化鑒定管
膠體金快速檢測卡

對于培養細胞樣品的詳細解說

時間:2015-8-4閱讀:313
分享:

對于培養細胞樣品:
1. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
2. 對于貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。
對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注:RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如NF-kappaB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 九色www | 狠狠干妹子| 激情丁香 | 中国老师精69xxxxxx免 | 无码人妻精品专区在线视频 | 欧洲亚洲一区二区三区 | 日韩无套无码精品 | 日本丰满人妻久久久久久久 | 精品在线视频一区二区 | 国产自产在线视频一区 | 久久久久亚洲一区二区三区 | 中文在线免费一区三区 | 日本大逼| AV天堂中AV世界中文在线播放 | 精品视频在线观看99 | 日韩精品视频一区二区三区 | 又黄又湿啪啪响18禁男男 | 国产高清女同学巨大乳在线观看 | 粉嫩av一区二区三区在线看 | 日韩人妻一区二区三区蜜桃视频 | 99999久久久久久亚洲 | 国产女人十八毛片A级毛片 ass日本丰满熟妇pics | 国产成年人在线观看 | 久久久国产一区二区三区四区 | 国产全黄a一级毛片91 | 中文字幕亚洲欧美日韩2019 | 国产三极片 | 中出在线观看 | 欧美日韩综合一区二区在线观看视频 | 欧美xxx日本 | 国产剧情av一区二区 | www.日本免费 | 亚洲国产精品18久久 | 人人干国产 | 免费一级一片 | 欧美日产国产精品 | 亚洲国产香蕉碰碰人人 | 女人被添全过程A片久久AV | 国产美女裸体永久无遮挡 | 操操操插插插 | 麻豆传谋在线观看免费mv |