网红主播精品视频在线观看_草久在线播放_免费人成在线观看成人片_国产高清乱子精品偷伦对白_国产无遮挡色视频免费观看性色_亚洲精品色婷婷在线影院

上海酶聯生物耗材有限公司
免費會員
ELISA試劑盒
ELISA試劑盒代測
免疫組化試劑盒代測
ATCC細胞株
sigma試劑
金標試劑盒
細胞株
病理耗材
干燥培養基(Dehydrated Culture Media)
食品科研檢測試劑
動物血清
細菌生化鑒定管
膠體金快速檢測卡

在細胞內表達siRNA引發基因沉默

時間:2013-6-13閱讀:632
分享:

       RNAi在哺乳動物細胞中通常用于阻斷特定基因的表達從而研究基因的功能,常見的做法是將靶向特定基因的大約21堿基長短的雙鏈siRNAs(small interfering RNAs),或者是45—50-mer的發夾結構RNA(small hairpin RNA, shRNA)轉染到細胞。shRNA在細胞內會自動被加工成為siRNA,從而引發基因沉默或者表達抑制。

        現在有多個報道說通過質粒表達siRNAs同樣可以抑制特定基因的表達。盡管細節各有不同,但載體大都是用PolIII啟動子啟動編碼shRNA(small hairpin RNA)的序列。選用PolIII啟動子的原因在于這個啟動子總是在離啟動子一個固定距離的位置開始轉錄合成RNA,遇到4—5個連續的U即終止,非常。當這種帶有PolIII 啟動子和shRNA編碼序列的質粒轉染哺乳動物細胞時,這種能表達siRNA的質粒確實能夠下調特定基因的表達,抑制范圍包括外源基因和內源基因。

         采用這種方法的優點在于,通過siRNA表達質粒的選擇標記,siRNA載體能夠更長時間地抑制目的基因表達。當然還有一點,那就是由于質粒可以復制擴增,相比起化學合成來說,這就能夠顯著降低制備siRNA的成本。因為質粒的價錢大約是3000多人民幣,還不到化學合成1條21nt的RNA價格的一半,但是就可以自行制備siRNA而不受數量的限制。

        生物通在這里為大家介紹幾種不同的siRNA合成質粒,但是大家要注意的是這里介紹的siRNA質粒是不同于體外轉錄合成RNA的質粒(生物通在后文會繼續為大家介紹),因為這里制備的是用于哺乳動物細胞實驗的siRNA,而不是長鏈的RNA(長鏈的dsRNA不適宜用在哺乳動物細胞,因為會引發非特異抑制)

pSilencer siRNA 表達載體系列是用于在培養的哺乳動物細胞中表達siRNA的一系列載體。在載體上包含有RNA聚和酶III (Pol III)啟動子,氨芐抗性基因和大腸桿菌復制子,只要將編碼一小段對應目的基因特異序列的、其RNA能形成發夾結構(就是回文結構)的DNA序列插入載體中Pol III 啟動子的下游,轉入哺乳動物細胞,載體就能表達出發夾結構的RNA,這種RNA很快在細胞中加工成為siRNA。

pSilence 1.0-U6

載體pSilence 1.0-U6是采用小鼠U6 Pol III啟動子。這個由哈佛大學開發的載體已經成功的在Hela、H1299, U-2 OS和C-33A細胞中敲除了cdk-2和laminA/C的表達。這個載體經過Apa I和EcoR I酶切線性化和純化,你只需要合成一對55-mer的寡核苷酸,帶有4個堿基的突出(當然是對應Apa I和EcoR I酶切位點咯),一起退火、快速連接就可以轉化了。在購買線性化的質粒同時,廠家還提供帶有GAPDH siRNA的環形質粒對照(萬一線性質粒不夠用還可以自己擴增再切嘛!)

pSilencer 2.0-U6 and pSilencer 3.0-H1
這兩個載體帶有不同的RNA Pol III 啟動子,pSilencer 2.0-U6帶的是人的U6啟動子,pSilencer 3.0-H1則是用H1 RNA啟動子(RNase P的一個組成部分)。這兩個載體都是用BamH I和Hind III線性化并且經過純化的,方便定向克隆。這兩個載體都是以線性化的質粒供應,同時還提供GAPDH對照和一個空白對照質粒,以及DNA退火的Buffer。

這些表達載體已經成功的在Hela細胞中抑制了包括Cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在內的多個基因的表達。實驗表明:能夠被化學合成或者體外合成的siRNAs抑制的基因同樣可以被表達相同序列的載體生成的siRNAs抑制。
 

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 国产一级特aa特黄蜜臀视频 | 麻豆激情视频在线 | 日本丰满少妇毛茸茸 | 四虎成人精品无码永久在线 | 欧美乱码一区二区三区 | 台湾一级毛片永久免费 | 激情aⅴ欧美一区二区三区 亚洲一区二区三区免费 | 色七七影院在线观看 | 操你啦青青草 | 久久精品人人槡人妻人人玩 | av免费在线观看一区 | 黄色成人网站免费无码av | 欧美日韩国产另类图片区 | 日韩精品在线免费观看视频 | 在线精品国产一区二区三区88 | 无码国产午夜福利片在线观看 | 国产精品一区二区免费不卡 | 情欲综合网 | 亚洲日本一区二区一本一道 | 国产免费又爽又刺激在线观看 | 日韩国产高清在线观看 | 久久精品国产欧美 | 伊人春色精品 | 在线免费观看麻豆视频 | 国产在线观看av | 9999国产 | 日本free护士videosxxxx | 日本xxxxxxx18—19 | 天堂网在线观看视频 | 最新日本一道免费一区二区 | 午夜国产情侣在线播放 | 成人一级黄色毛片 | 国产在线欧美 | 五月婷av综合网色伊人苍井空 | 农村人伦偷精品视频a人人澡 | 久久精品亚洲乱码成在人线 | 久久性插| 激情国产AV做激情国产爱 | 国产成人8x人网站在线视频 | 久久99国产精品久久99果冻传媒新版本 | 国产九色自拍视频 |