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小鼠ELISA試劑盒技術的發展

時間:2014-1-20閱讀:270
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   臨床測定技術的發展主要在于方法學的發展,而方法學的發展依托于小鼠ELISA試劑盒生產技術不斷進步更新和新型標記物的應用。目前,分子生物學正在并zui終肯定會讓我們對整個生命科學有一個全面而*的認識,其對免疫測定技術發展的影響也是直接而又有效的,它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

1、基因工程試劑對免疫測定技術發展的影響

免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應,所以任何的診斷試劑離不開的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來,隨著分子生物學的發展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現。

HBsAg試劑特點(檢測模式:臨床抗體夾心法):

包被抗體為山羊多抗,多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應性。

酶表抗體為與HBsAg有不同結合位點的鼠復合單位。

可測得HBsAg變異樣品。

提高檢測的特異性(99。98%)

提高檢測的靈敏度,應用Parl  Ehrich 學說(PEI)HBsAg標準品,對ad標準品的靈敏度為0。05ng/ml對ay標準品靈敏度為0。025ng/ml

2、基因工程

較早用于免疫測定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg,這兩種基因工程抗原的出現,較好地解決了抗HBc和HBe的測定問題。因為要從病毒本身去大量獲取這兩種純抗原較為困難,并且這一點對于難培養的病原微生物來說,如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。

2。1  HCV-Elisa試劑

HCV目前尚不能體外培養,只能用基因工程或化學合成方法獲取HCV結構和非結構區的各種抗原片斷,已知HCV基因組有7個功能區組成:核心、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5(有分為NS和NS5b)區,合成抗原的優點是易于純化,特異性好,抗原抗體反應強。

2。1。1  *代抗HCV-小鼠ELISA試劑盒

-由美國ortho公司克隆C1003抗原幾個片斷與人超氧化物歧化酶(SOD)結合。用酵母從病毒基因組非結合區得到表達,表達為融合蛋白,亦作為包被固相載體。

-抗原組合:NS4 區二個基因片斷為NS 5-1-1和C1003

-特性:IgG抗C100在發病后數月后,才檢出,故不宜作早期診斷。

-約由20%的病人不出現抗體。IgM抗-C100急性期檢出率只有64%。

-C100的抗原性較弱,在HCV復制中,不能充分暴露宿主的免疫系統。

-特異性和靈敏性較差。

2。1。2  第二代HCV-小鼠ELISA試劑盒

-用基因重組的HCV結構蛋白與非結構蛋白抗原包被固相載體。

-抗原組合:核心區(C區)多肽C22  NS區多肽C33  C1003和NS 5-1-1

-增加C22區和C33區后,抗體出現早,有助早期診斷,提高陽性率。有利早期診斷。

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