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TC-hxbz-213SV40永生化的人胚腎上皮細(xì)胞,293T 細(xì)胞 
ATCC細(xì)胞株的品質(zhì)，鼠小腦細(xì)胞,C8-D1A細(xì)胞國內(nèi)細(xì)胞的價(jià)格。對(duì)于初做細(xì)胞培養(yǎng)研究的工作者來說，會(huì)經(jīng)常出現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)問題，公司在細(xì)胞培養(yǎng)問題方面做了些總結(jié)，希望對(duì)你們能有所幫助。
【鼠小腦細(xì)胞,C8-D1A細(xì)胞培養(yǎng)液pH值變化太快】CO2張力不對(duì)。培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊。NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足。培養(yǎng)液中鹽濃度不正確。細(xì)菌、酵母或真菌污染。
按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5％到10％。（2）改用不依賴CO2培養(yǎng)液，松開瓶蓋1/4圈，加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度，在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hank’s鹽配制的培養(yǎng)液，丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
【培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變】用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來。冰凍保存培養(yǎng)液，用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后除菌，將培養(yǎng)液加熱到37℃，搖動(dòng)使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液。
【培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，同時(shí)pH 發(fā)生變化】細(xì)菌或真菌污染，丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
【培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁】*消化過度；支原體污染；培養(yǎng)液中無貼壁因子，縮短*消化時(shí)間或降低*濃度，分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
【懸浮細(xì)胞成簇】培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子。支原體污染。蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解釋放DNA，用無鈣鎂*洗滌細(xì)胞，輕輕吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液，分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物，用DNase I處理細(xì)胞。
【原代細(xì)胞培養(yǎng)物污染】原代培養(yǎng)組織在進(jìn)入培養(yǎng)前已污染，培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的*反復(fù)沖洗組織。
【培養(yǎng)細(xì)胞死亡】培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2。培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大。細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷。培養(yǎng)液滲透壓不正確。培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積；檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；取新的保存細(xì)胞種；檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓。注意：大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞能耐受滲透壓為260–350mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓，換入新鮮培養(yǎng)液。
【培養(yǎng)細(xì)胞生長減慢】由于更換不同培養(yǎng)液或血清。培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如*或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染。試劑保存不當(dāng)。
比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)。
1）增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度。
2）讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液。
3）換入新鮮配制培養(yǎng)液。
4）補(bǔ)加*或生長因子。
5）用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物。或用抗生素除菌。
6）血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養(yǎng)液需在2–8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2–8℃7）保存，并在2周內(nèi)用完。
8）接種細(xì)胞起始濃度太低，細(xì)胞已老化，支原體污染。
9）增加接種細(xì)胞起始濃度。
10）換用新的保種細(xì)胞。
11）分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
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