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小鼠T淋巴細胞瘤(SV40T抗原轉染),Cyc-tAg細胞

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更新時間:2016-04-03 04:38:43瀏覽次數:388次

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小鼠T淋巴細胞瘤(SV40T抗原轉染),Cyc-tAg細胞培養液pH值變化太快】CO2張力不對。培養瓶蓋擰得太緊。NaHCO3緩沖系統緩沖力不足。培養液中鹽濃度不正確。細菌、酵母或真菌污染。
按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度,2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5%到10%。(2)改用不依賴CO2培養液,松開瓶蓋1/4圈,加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度,在CO2培養環境中改用基于Earle’s鹽配制的培養液,在大氣培養環境中培養改用Hank’s鹽配制的培養液,丟棄培養物或用抗生素除菌。
【培養液出現沉淀,但pH值不變】用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養基成分沉淀下來。冰凍保存培養液,用去離子水反復沖洗玻璃器皿,然后除菌,將培養液加熱到37℃,搖動使其溶解如沉淀仍然存在,丟棄培養液。
【培養液出現沉淀,同時pH 發生變化】細菌或真菌污染,丟棄培養物或用抗生素除菌。

【培養細胞不貼壁】*消化過度;支原體污染;培養液中無貼壁因子,縮短*消化時間或降低*濃度,分離培養物,檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染,丟棄培養物。

【懸浮細胞成簇】培養液中含鈣、鎂離子。支原體污染。蛋白酶過度消化使得細胞裂解釋放DNA,用無鈣鎂*洗滌細胞,輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液,分離培養物,檢測支原體。如發現支原體污染,丟棄培養物,用DNase I處理細胞。
【原代細胞培養物污染】原代培養組織在進入培養前已污染,培養前用含高濃度抗生素的*反復沖洗組織。
【培養細胞死亡】培養箱內無CO2。培養箱內溫度波動太大。細胞凍存或復蘇過程中損傷。培養液滲透壓不正確。培養液種有毒代謝產物堆積;檢測培養箱內CO2檢查培養箱內溫度;取新的保存細胞種;檢測培養液滲透壓。注意:大多數哺乳動物細胞能耐受滲透壓為260–350mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養液滲透壓,換入新鮮培養液。
【培養細胞生長減慢】由于更換不同培養液或血清。培養液中一些細胞生長必需成分如*或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。培養物中有少量細菌或真菌污染。試劑保存不當。
比較新培養液與原培養液成分,比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。
1)增加起始培養細胞濃度。
2)讓細胞逐漸適應新培養液。
3)換入新鮮配制培養液。
4)補加*或生長因子。
5)用無抗生素培養液培養,如發現污染,丟棄培養物。或用抗生素除菌。
6)血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養液需在2–8℃避光保存。含血清*培養液在2–8℃7)保存,并在2周內用完。
8)接種細胞起始濃度太低,細胞已老化,支原體污染。
9)增加接種細胞起始濃度。
10)換用新的保種細胞。
11)分離培養物,檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染,丟棄培養物。
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