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ELISA試劑盒實驗基礎(chǔ)操作步驟的注意事項

時間:2015/1/5閱讀:305
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ELISA試劑盒實驗基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

在操作步驟中,還有這幾個必知的注意事項: 

1. 溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。

2. 將液體加到酶標(biāo)孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。        

3. 洗板時,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加*。沒有洗板機(jī)時,倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干。

4. 洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.40.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫6作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

5. ELISA試劑盒實驗中,液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。

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