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雞單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSVⅡ-Ab)試劑盒操作方法

時間:2015-8-12閱讀:386
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本試劑盒僅供研究使用。

                                                                     48T


使用目的:

本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSV-Ab)表達

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSV-Ab)表達。用純化的雞單純皰疹病毒Ⅱ型 (HSV-Ab)抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSV-Ab)相結合經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的單純皰疹病毒Ⅱ型 (HSV-Ab)抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中雞單純皰疹病毒Ⅱ型抗體(HSV-Ab)的存在與否。

試劑盒組成

1

20倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

3ml×1

2

酶標試劑

3ml×1

8

陽性對照

0.5ml×1

3

酶標包被板

12孔×4

9

陰性對照

0.5ml×1

4

樣品稀釋液

3ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

3ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

3ml×1/

12

密封袋

1

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

3.溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。  

4.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.溫育:操作同3

8.洗滌:操作同5

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

操作程序總結:


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