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人轉錄因子抗體-1elisa試劑盒

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所  在  地上海

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更新時間:2018-04-19 21:04:28瀏覽次數:260次

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人轉錄因子抗體-1elisa試劑盒雙抗體夾心法操作步驟:

1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為110μgml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。   

2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml37 孵育0.51小時,洗滌。

4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37 1030分鐘。

5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

人轉錄因子抗體-1elisa試劑盒其他elisa試劑盒:

F2565-B人分泌性白細胞蛋白酶抑制因子elisa試劑盒
F2566-A人阿黑皮素原(POMC)elisa試劑盒
F2566-B人阿黑皮素原elisa試劑盒
F2567-A人多效生長因子(PTN)elisa試劑盒
F2567-B人多效生長因子elisa試劑盒
F2568-A人可溶性白細胞分化抗原28(sCD28)elisa試劑盒

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫,試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1、 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?/span> 100 ,余孔分別加標準品或待測樣品100 ,注意不要有氣泡,加樣 時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37 溫育2小時。為保證實驗結果有效

性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2、 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100 (臨用前配制),酶標板加上覆膜,37 溫育1小時。

3 棄去孔內液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400 /每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4、 每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100 ,加上覆膜,37 溫育1小時。

5、 棄去孔內液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。

6、 每孔加底物溶液90 ,酶標板加上覆膜37 避光顯色(反應時間控制在15-30分鐘,當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時,即可終止)。

7 每孔加終止溶液50 ,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物 液的加入順序相同。

8 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。

 

 

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