試劑盒名稱(chēng)：兔*型纖溶酶原激活物(uPA)elisa試劑盒

規(guī)      格：48T

產(chǎn)品的用途：僅供科研ELISA檢測(cè)試劑盒

檢測(cè)的原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

標(biāo)本的處理：

（1）細(xì)胞培養(yǎng)上清液

根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品，然后按照說(shuō)明書(shū)所述方法檢測(cè)。*稀釋濃度是稀釋5倍。

（2）腦脊液

根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品，然后按照說(shuō)明書(shū)所述方法檢測(cè)。*稀釋濃度是5倍。

（3）血漿

①用EDTA2K離心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分鐘，4℃，分離血漿樣品，然后儲(chǔ)存在零下80℃直到使用。

②用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液5倍稀釋血漿以避免血漿中的干擾物質(zhì)影響檢測(cè)，按照說(shuō)明書(shū)方法檢測(cè)。

兔*型纖溶酶原激活物(uPA)elisa試劑盒顯色的重要性

顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng)，此時(shí)酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素。在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈色加強(qiáng)。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測(cè)定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)間一般不需要嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，及時(shí)判斷。

OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深，再延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行，顯色反應(yīng)結(jié)束時(shí)加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用酸終止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。

TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺(tái)上，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時(shí)間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)，隨即逐漸減弱，至2小時(shí)后即可*消退至無(wú)色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類(lèi)終止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)間(12-24小時(shí))不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類(lèi)酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此時(shí)可用特定的波長(zhǎng)(450nm)測(cè)讀吸光值。

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