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小鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶elisa試劑盒

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所  在  地上海市

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更新時間:2018-01-13 05:12:17瀏覽次數(shù):167次

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試劑盒名稱:小鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶elisa試劑盒

英文名稱:Mouse phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK elisa Kit

規(guī)    格:96T
保存條件:2-8℃

自備材料:
1. 蒸餾水。

2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

4.  標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

5.  7℃恒溫箱。

實驗步驟:
1.分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。人雌激素(E)每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育60分鐘。
2.棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。
3.人雌激素(E)每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
4.取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
5.人雌激素(E)測定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。?測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
6.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,人雌激素(E)再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

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