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豬血小板活化因子(PAF)elisa試劑盒

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更新時(shí)間:2018-03-11 23:38:09瀏覽次數(shù):167次

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豬血小板活化因子(PAF)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:

本試劑盒采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),測(cè)定樣品中大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的水平。向預(yù)先包被大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和HRP標(biāo)記的大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)抗體,經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的組分,然后再加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的濃度呈正相關(guān)。

豬血小板活化因子(PAF)elisa試劑盒ELISA操作常見問題:

1.邊緣效應(yīng) 使用96孔板的ELISA測(cè)定中,常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)",即外周孔顯色較中心孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體,在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中,將板從室溫(通常在25℃左右)置于37℃溫箱,板也升溫時(shí),在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí),將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)",并且可提高測(cè)定的重復(fù)性。

2.加樣 在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點(diǎn)是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以,有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽性,下次測(cè)定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。

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