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上海滬峰生物科技有限公司
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ELISA試劑盒測試要求

時間:2014/12/19閱讀:254
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1做好對照

正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2實驗條件的選擇

在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。

(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4 18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

3實驗通過規則

1、要保證移液槍的準確性,誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但有專業人員進行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。
4、實驗時,要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
8、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
9、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發。
10、洗板時,每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使清洗更加*。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

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