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上海滬峰生物科技有限公司
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人鈣聯(lián)蛋白elisa試劑盒的注意事項

時間:2015/4/2閱讀:340
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本公司的人鈣聯(lián)蛋白elisa試劑盒,專注于ELISA相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn),力求將ELISA技術(shù)的加樣、溫育、洗板及判讀結(jié)果過程的科學(xué),有機、系統(tǒng)地結(jié)合,盡可能地減少各環(huán)節(jié)的人為因素的影響,實現(xiàn)ELISA技術(shù)的自動化操作。

下面就是我司技術(shù)人員特地為您解析elisa試劑盒的幾點注意事項:

1.正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2.在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH9.09.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用41824小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.11.010μgml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為110μgml

3)酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

4)酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMBABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

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