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不同類(lèi)型的樣本的處理方法

時(shí)間:2017/8/1閱讀:438
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一般咱們可用于ELISA檢測(cè)的樣本是有多種類(lèi)型的,如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或安排勻漿液等,不一樣類(lèi)型的檢測(cè)樣本前期的處理辦法是不一樣的。準(zhǔn)確的處理樣本是確保ELISA檢測(cè)的準(zhǔn)確性和準(zhǔn)確性的*步。ELISA試劑盒
1、血清
血清是zui常用于ELISA檢測(cè)的一類(lèi)樣本,處理也比較簡(jiǎn)單。用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管搜集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一個(gè)晚上,使血清分出。(將試管或離心管歪斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的分出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,細(xì)心搜集上清。主張將血清分裝多份,-20℃或-80℃保留,防止重復(fù)凍融。
采血過(guò)程中應(yīng)防止溶血,由于紅細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色,而致使檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。一起也應(yīng)防止細(xì)菌污染,由于菌體內(nèi)也許富含內(nèi)源性的HRP然后致使檢測(cè)的假陽(yáng)性。
2、血漿
用含抗凝劑的*或離心管搜集血液標(biāo)本,標(biāo)本搜集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保留,防止重復(fù)凍融。防止使用溶血或高血脂的標(biāo)本。常用的抗凝劑為EDTA、*和*等,檢測(cè)時(shí)還應(yīng)細(xì)心閱讀試劑盒說(shuō)明書(shū),查看試劑盒是不是對(duì)抗凝劑有特殊要求。ELISA試劑盒
3、細(xì)胞培養(yǎng)上清
取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除掉細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保留,防止重復(fù)凍融。
4、細(xì)胞裂解液
1)吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用*消化細(xì)胞,加恰當(dāng)培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來(lái)。懸浮細(xì)胞可省掉。
2)搜集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。
3)參加恰當(dāng)?shù)念A(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前參加蛋白酶按捺劑)重懸細(xì)胞。一般6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需求150~250μL PBS重懸。
4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫凍結(jié)樣品,重復(fù)凍融幾回,使細(xì)胞充沛裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以到達(dá)裂解的意圖。
5)4℃ 10000×g 離心10min,除掉細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保留,防止重復(fù)凍融。
5、安排勻漿液
1)將安排樣本用PBS (0.01 [錨點(diǎn)] [錨點(diǎn)] M, PH 7.4) 沖刷,洗去安排外表殘留的血液或雜質(zhì)。
2)將安排塊稱(chēng)重,記載后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充沛
3)將安排按必定的份額參加預(yù)冷的PBS(臨用前參加蛋白酶按捺劑)勻漿,勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。(一般按安排分量:PBS體積=1:9的份額勻漿,例如1g的安排樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS,詳細(xì)體積可根據(jù)試驗(yàn)需求恰當(dāng)調(diào)整,檢測(cè)后核算樣品濃度時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))
4)吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保留,防止重復(fù)凍融。
6、尿液、唾液等別的液體生物樣本
1000×g離心20min,取上清即可檢測(cè)。
總的來(lái)說(shuō),由于ELISA只能檢測(cè)可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)確保一切樣本均為弄清的液體,沉積或懸浮物都應(yīng)離心去掉。ELISA試劑盒為了確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性,保留于-20℃或-80℃的樣本在1~6個(gè)月內(nèi)檢測(cè);4℃保留的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。別的,還應(yīng)確保樣本不含NaN3,由于NaN3會(huì)按捺HRP的活性,然后致使假陰性的成果。

 

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