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ELISA試劑盒實驗準備分析保溫常識

時間:2018/3/7閱讀:232
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ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA 中似不恰當。ELISA 屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。elisa試劑盒以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA 反應總是需要一定時間的溫育。
ELISA試劑盒溫育常采用的溫度有 43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA 方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2 小時,產物的生成可達。為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在 43℃進行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中,以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA 中一般不予采用。
ELISA試劑盒保溫的方式除有的 ELISA 儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將ELISA 板置于水浴箱中,ELISA 板底應貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA 板應放在濕盒內,濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA 板放在濕紗布上。
濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴還是濕盒溫育,反應板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應,操作時的室溫應嚴格限制在規定的范圍內,標準室溫溫度是指 20-25℃,但具體操作時可根據說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,ELISA 板只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板同時測定。
一個良好的實驗操作環境可以保證ELISA試劑盒測定結果更準確。實驗操作的嚴謹性與實驗操作規范密不可分,未使用的試劑應儲存于2-8℃,使用時應回溫到室溫(20-25℃)。切忌不同批次的試劑混合使用,要經常檢查酶標儀和微量移液器的精度盒準備度,這樣才能保證實驗的可操作性。

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