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ELISA試劑盒樣本與實驗的重要性

時間:2018/3/14閱讀:176
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ELISA試劑盒即酶聯免疫吸附法,是一種常用的固相酶免疫測定辦法。 由于ELISA辦法簡略,便利,活絡,特異性強且不需求特別設備(只需求酶標儀就可以),所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。
可是影響ELISA測定的要素有很多,而其操作中需求有一定的技能請求,如操作辦法,環境,樣本等,有時??梢姷揭恍╁e誤成果(即假陽性或假陰性)等,樣本的重要性關系到全部試驗的成果,上海極威生物為我們解讀ELISA檢查的影響要素之一-樣本的影響
1、ELISA試劑盒樣本的保留:在冰箱中保留過久的標本,在間接法ELISA測定中會致使本底過深、會構成假陽性;為防止上述問題,在測定血清標本時能新鮮收集;假如不能當即測定,依據相應的時刻保留相應的溫度,5 d內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應-20℃低溫凍存;如凍存后融解的標本,蛋白質有些濃縮,散布不均,應充沛混合后再測定,但混勻時應輕柔,不行強烈振動。
2、樣本的時刻:由于塑料試管能吸附抗原物質,所以樣本長時刻放在塑料管內會使樣本內抗原含量降低構成假陰性。的辦法是運用真空*;并運用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會添加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA體系中辣根過氧化物酶活性。
3、樣本受細菌污染:因菌體中可能會含有內源性辣根過氧化物酶,因而,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,可能會發生非特異性顯色而干擾測定成果。
4、ELISA試劑盒樣本的凝結:樣本凝結不全。在試驗中,有的時分心急為了爭取時刻快速檢查,在血液還未開端凝結的時分就強行離心別離血清,致使血清中仍殘留有些纖維蛋白原,在ELISA測定過程中構成肉眼可見的纖維蛋白塊,易構成假陽性成果;因而血液標本收集后有必要使其充沛凝結后再別離血清。
5、ELISA試劑盒樣本溶血:溶血標本及混有紅細胞的血清選用ELISA法檢查易發生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗刷過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態氧(O),然后催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色,發生假陽性[2]。所以嚴峻溶血標本禁用。

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