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ELISA中雙抗體夾心法與間接法的區(qū)別在哪

時(shí)間:2018/4/4閱讀:537
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雙抗體夾心法:
(1) elisa試劑盒包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗刷緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗刷,下同)。
(2) 加樣:加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗刷。(一同做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
(3) 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,elisa試劑盒參與新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗刷。
(4) 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中參與暫時(shí)制作的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
(5) 中止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。
(6)elisa試劑盒效果斷定:可于白色布景上,直接用肉眼調(diào)查效果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)標(biāo)明。也可測(cè)O·D值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值,若大于規(guī)矩的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。間接法:用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日洗刷3次。加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷。(一同做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,參與新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗刷,終究一遍用DDW洗刷。其他進(jìn)程同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

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