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小鼠尿素氮(BUN)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

時間:2016-8-25閱讀:218
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實驗原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠尿素氮(BUN)水平。用純化的小鼠尿素氮

(BUN)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入尿素氮(BUN),再與 HRP 標(biāo)記的尿素氮(BUN)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底 物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。 顏色的深淺和樣品中的尿素氮(BUN)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠尿素氮(BUN)濃度。

試劑盒組成

 

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7

終止液

6ml×1 瓶

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1 瓶

8

標(biāo)準(zhǔn)品(3200pmol/L)

0.5ml×1 瓶

3

酶標(biāo)包被板

12 孔×8 條

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1 瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1 瓶

10

說明書

1 份

5

顯色劑 A 液

6ml×1 瓶

11

封板膜

2 張

6

顯色劑 B 液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1 個

標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟

1.    標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

 

 

 

 

2.    加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,

然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.    溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.    配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。

6.    加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。

7.    溫育:操作同 3。

8.    洗滌:操作同 5。

9.    顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10.  終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.  測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié):

 

 

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未 用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10.  如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。 保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

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