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ELISA試劑盒質量平衡及試驗規范

時間:2018-3-28閱讀:119
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ELISA試劑盒中通常有3次加樣步聚,即加標本,加酶物,加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留意不行濺起,不行產生氣泡。
加標本通常用微量加樣器,按規則的量參加板孔中。每次加標本應更換吸嘴,避免發作穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,再在其間參加血清標本,然后在微型震動器上震動1分鐘以確保混和。加酶物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器,使加液進程敏捷完結。在ELISA試劑盒中通常有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶物后。抗原抗體反響的完結需要有必定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA檢查試劑盒中似不恰當。
ELISA試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的只在固相表面上發作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗的機會,只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐,因此需經分散
才干到達反響的結尾。在其后參加的酶符號抗體與固相抗原的也相同如此。這即是為什么ELISA檢查試劑盒反響老是需要必定時刻的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體的適宜溫度。在樹立ELISA方法作反響動力學研討時,實驗標明,兩次抗原抗體反響通常在37℃經1-2小時,產品的生成可達高峰。為加快反響,可提高反響的溫度,有些實驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中,以構成zui多的沉積。但因所需時刻太長,在ELISA試劑盒中通常不予選用。
ELISA試劑盒的質量凹凸因素取決于這兩個方面
1.選材目標。
2.選材進程。
胎牛血清用于選材的胎牛應健康無病并且在的出世天數之內,ELISA試劑盒選材進程應嚴厲依照操作規程履行,制備出的血清要經過嚴厲的質量判定。格外請求有:
a.要經過濾膜過濾除菌,確保無菌;
b.證實所用血清中不含對所出產疫苗病毒的抑制物;
c.無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家請求無細菌噬菌體污染;
d.對細胞有杰出的支撐繁衍效果;
e.有必要來自有文件證實無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具有適當的監測體系。

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