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elisa檢測試劑盒試驗中經常遇到的問題及處理方案

時間:2018/4/2閱讀:204
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elisa檢測試劑盒試驗中經常遇到的問題及處理方案
制備過程中應注意的問題:
1.細菌的生長狀態:實驗中應密切注視細菌的生長狀態和密度,盡量使用對數生長期的細胞(一般通過檢測OD600來控制。DH5?菌株OD600為0.5時細胞密度是5×107/ml);
2.所有操作均應在無菌條件和冰上進行;
3.經CaCl2處理的細胞,在低溫條件下,一定的時間內轉化率隨時間的推移而增加,24小時達到zui高,之后轉化率再下降(這是由于總的活菌數隨時間延長而減少造成的);
4.化合物及無機離子的影響:在Ca2+的基礎上聯合其他二價金屬離子(如Mn2+或Co2+)、DMSO或還原劑等物質處理細菌,可使轉化效率大大提高(100-1000倍);
5.所使用的器皿必須干凈。跡量的去污劑或其它化學物質的存在可能大大降低細菌的轉化效率;
6.質粒的大小及構型的影響:用于轉化的應主要是超螺旋的DNA;
7.一定范圍內,轉化效率與外源DNA的濃度呈正比;
工作原理:
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
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