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elisa定量試劑盒實驗操作步驟具體介紹

時間:2018/9/14閱讀:449
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elisa定量試劑盒實驗操作步驟具體介紹
1. 光對葉綠素的破壞作用
   1)取4支小試管,其中兩支各加入5ml用水研磨的葉片勻漿。另外兩支各加入2.5ml葉綠體色素乙醇提取液,并用95%乙醇稀釋1倍。
   2)取1支裝有葉綠素乙醇提取液的試管和1支裝有水研磨葉片均漿的試管,放在直射光下,另外兩支放到暗處,40min后對比觀察顏色有何變化,解釋其原因。
2. 熒光現(xiàn)象的觀察
取1支20ml刻度試管加入5ml濃的葉綠體色素乙醇提取液,在直射光下觀察溶液的透射光與反射光顏色有何不同。
3. 皂化作用(綠色素與黃色素的分離)
   1)在做過熒光現(xiàn)象觀察的葉綠體色素乙醇提取液試管中加入1.5ml 20%KOH-甲醇溶液,充分搖勻。
   2)片刻后,加入5ml苯,搖勻,再沿試管壁慢慢加入1~1.5ml蒸餾水,輕輕混勻(勿激烈搖蕩),于試管架上靜置分層。若溶液不分層,則用滴管吸取蒸餾水,沿管壁滴加,邊滴加邊搖動,直到溶液開始分層時,靜置。可以看到溶液逐漸分為兩層,下層是稀的乙醇溶液,其中溶有皂化的葉綠素a和b(以及少量的葉黃素);上層是苯溶液,其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素。
4. 吸收光譜的觀察  將上述已分層的試管溶液,用分光鏡觀察兩類色素的吸收光譜,首先讓下層綠色素部分對準進光孔,看光譜有何變化;然后再將上層黃色素溶液對準進光孔,看光譜又有何變化。把觀察的結(jié)果用簡單的圖表示出來。
5. H 和Cu2 對葉綠素分子中Mg2 的取代作用
方法一:
   1)取兩支試管,*支試管加葉綠體色素提取液2ml,作為對照。第二支試管中加葉綠體色素提取液5ml,再加入5%HCl數(shù)滴,搖勻,觀察溶液顏色變化。
   2)當溶液變褐后,再加入少量醋酸銅粉末,微微加熱,觀察記載溶液顏色變化情況,并與對照試管相比較。
方法二:
另取醋酸-醋酸銅溶液20ml,以燒杯盛之。取新鮮植物葉片兩片,放入燒杯中,用酒精燈慢慢加熱,隨時觀察并記錄葉片顏色的變化,直至顏色不再變化為止。解釋原因。
注意事項
1.在低溫下發(fā)生皂化反應(yīng)的葉綠體色素溶液,易乳化而出現(xiàn)白絮狀物,溶液渾濁,且不分層。可激烈搖勻,放在30~40℃的水浴中加熱,溶液很快分層,絮狀物消失,溶液變得清澈透明。
2.分離色素用的圓形濾紙,在中心打的小圓孔,周圍必須整齊,否則分離的色素不是一個同心圓。

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