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免疫組化封閉血清的選擇和使用的研究

時間:2018/11/20閱讀:303
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做免疫組化時,一般都會封閉。以減少假陽性。

封閉主要是用于封去切片上一些非特異性吸附。用一種非特異性的蛋白,把那些容易吸附蛋白的空間和位點占起來,這樣,加上抗體時,抗體只能與對應的抗原去結合了。

一般封閉可以用5%的BSA,這個價格便宜,而且效果還行。但理論上,用與二抗同來源的正常血清會更好。

比如,一抗為國產的兔抗IL-2,二抗用標記的羊抗兔IgG。那么,封閉血清就選擇與二抗同來源的正常羊血清(一般為山羊)。而同理,如果一抗為羊抗IL-2,二抗可以選標記的兔抗羊IgG,封閉血清選擇正常兔血清。

使用時,可以用PBS將正常血清稀釋20倍,直接滴加在切片上,37℃度10-30分鐘,直接甩掉,不洗,輕輕的吸一下旁邊的液體,再加一抗。聽說4℃過夜比起37℃兩小時背景會干凈一些。當然,時間也會長一些。

關于抗體質量,也許種類太多,我們要努力的路還很長。

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