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elisa試劑盒
原代細(xì)胞
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大鼠脂聯(lián)素Elisa Kit試劑配制及注意事項(xiàng)

時(shí)間:2019/3/15閱讀:362
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大鼠脂聯(lián)素Elisa Kit試劑配制:

1、大鼠脂聯(lián)素Elisa Kit說明書酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。

2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。

3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

注意事項(xiàng):

1加樣:

①大鼠脂聯(lián)素Elisa Kit說明書實(shí)驗(yàn)樣本過多時(shí),可分批次操作,以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長造成的誤差;

②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;

③作定量試驗(yàn)時(shí),使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個(gè)移液頭,防止交叉污染。

2.溫育:

①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時(shí)間的條件;

②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;

③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水??;

3.洗板:

①手工洗板時(shí),拍板時(shí)要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;

②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出;

③為了洗滌效果好,實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù);

4.顯色:

ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。

5.判定:

讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí),反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試。

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