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篩選基因讓酵母生產(chǎn)更多的蛋白質(zhì)

時間:2019/5/15閱讀:176
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                                      篩選基因讓酵母生產(chǎn)更多的蛋白質(zhì)

    研究人員已經(jīng)鑒定出9個基因靶點,通過組合沉默使工程酵母細胞中的蛋白質(zhì)產(chǎn)量提高了2.2倍。

   “這個概念可以推廣到其他酵母蛋白生產(chǎn)者,甚至一些絲狀真菌和哺乳動物細胞工廠。任何一個與蛋白質(zhì)生產(chǎn)者合作的組織都可以利用這些發(fā)現(xiàn),”研究人員說。

       提高了一種模型蛋白,α-淀粉酶(α-amylase)的酵母生產(chǎn),證明了細胞內(nèi)目標(biāo)蛋白(重組蛋白)的總生產(chǎn)價值。

沉默是一種強有力的工具

    通過RNA干擾(RNAi)確定幾種適合沉默的基因靶點,獲得優(yōu)化的酵母菌株。通過構(gòu)建與基因互補的短/長鏈RNA,干擾RNA與互補的mRNA相互作用并引導(dǎo)其降解,從而減少需要翻譯的mRNA,降低靶基因的表達。

    RNAi介導(dǎo)的表達下調(diào)是一個有效的合理篩選新基因靶點的有力工具,因為它既便宜又快速。

廣泛的文庫篩選確定了9個目標(biāo)基因

    通過觀察α-淀粉酶分泌的增強作為重組蛋白生產(chǎn)改善的指標(biāo),研究人員分析了酵母中大約243000種沉默效應(yīng)物。

    通過對含有分泌這種酶的單個細胞的微小液滴進行廣泛篩選,研究人員成功地篩選出了9個基因,這些基因受抑制后,改善了蛋白質(zhì)的分泌。這些基因參與細胞代謝、細胞周期以及蛋白質(zhì)修飾和降解。

    所有這些基因在不同的下調(diào)水平表達時都會影響重組蛋白的產(chǎn)生。研究人員說:“在試圖建立用于生產(chǎn)工業(yè)酶或生物制藥蛋白的優(yōu)化酵母細胞工廠時,這些知識非常重要。”

    科學(xué)家們首先篩選出有益的RNAi目標(biāo)。之后,他們研究了沉默的組合,得出了所謂的半理性方法(semi-rational approach)。 

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