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PCR反應出現非特異性擴增問題原因及對策

時間:2022/10/24閱讀:1804
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出現非特異性擴增:

PCR擴增后出現的條帶與預計的大小不一致,或大或小,或者同時出現特異性擴增帶與非特異性擴增帶。

1、  引物與靶序列不*互補或引物聚合形成二聚體。
2、 Mg2+離子濃度過高。
3、 退火溫度過低。
4、 PCR循環次數 過多有關。
5、 酶的質和量,往往一些來源的酶易出現非特異條帶而另一來源的酶則不出現,酶量過多有時也會出現非特異性擴增。
其對策有:必要時重新設計引 物。減低酶量或調換另一來源的酶。降低引物量,適當增加模板量,減少循環次 數。適當提高退火溫度或采用二溫度點法(93℃變性,65℃左右退火與延伸)。

 


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