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引物純化方式有哪些,如何選擇?
1、C18柱脫鹽:
有人稱(chēng)其為簡(jiǎn)易反相柱,它對(duì)DNA有特異性的吸附,可以被有機(jī)溶解洗脫,但不會(huì)被水洗脫,所以能有效地去除鹽分。它不能有效去除比目的片段短的小片段。實(shí)際上,它是一種脫鹽的作用。這種方法一般不會(huì)對(duì)普通PCR反應(yīng)產(chǎn)生影響。對(duì)于需要用于測(cè)序、克隆的引物不能使用這個(gè)級(jí)別。????
2、OPC純化:
OPC純化是根據(jù)DNA保護(hù)基(DMTr基)和Cartridge柱中樹(shù)脂間的親合力作用的原理進(jìn)行純化目的DNA片段。OPC法純化的DNA純度大于95%。適用于40mer以下引物的純化。
3、PAGE純:
PAGE純化法是使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,對(duì)DNA片段進(jìn)行分離,然后從凝膠中回收目的DNA的方法。PAGE純化法也是一種非常有效的DNA純化方法,純化后的DNA純度大于95%,對(duì)長(zhǎng)鏈Oligo DNA (大于50mer)的純化特別有效。?
4、HPLC純化:
HPLC純化是使用高效液相色譜的原理,對(duì)DNA片段進(jìn)行純化。純度可以大于99%。主要用于短鏈和修飾引物的純化。該法的弱點(diǎn)是成本較高,批量生產(chǎn)效率不高。?
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