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當前位置:上海邦景實業(yè)有限公司>>技術文章>>歸納影響pcr特異性的參考因素
許多因素可以影響pcr的特異性,在此我們作一歸納,供大家參考:
1、退火步驟的嚴格性:提高退火溫度可以減少不匹配的雜交,從而提高特異性。
2、減短退火時間及延伸時間可以減少錯誤引發(fā)及錯誤延伸。
3、引物二聚體是最常見的副產品,降低引物及酶的濃度也可以減少錯誤引發(fā),尤其是引物的二聚化。
4、改變mgcl2(有時kcl)濃度可以改進特異性,這可能是提高反應嚴格性或者對taq酶的直接作用。
一般認為PCR產物應在48h以內完成電泳檢測,有些最好于當日電泳檢測,大于48h后帶型就會出現不規(guī)則,甚至消失。
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