15000017673
當前位置：上海邦景實業有限公司>>技術文章>>PCR反應循環參數剖析
PCR反應循環參數剖析:
1.預變性
模板DNAwan全變性與PCR酶的wan全激活對PCR能否成功至關重要，建議加熱時間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時間為兩分鐘。
2.變性步驟
循環中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列wan全變性，可能的情況下可縮短該步驟時間。變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不徹di，易造成擴增失敗。
3.引物退火
退火溫度需要從多方面去決定，一般根據引物的Tm值為參考，根據擴增的長度適當下調作為退火溫度。然后在此次實驗基礎上做出預估。退火溫度對PCR的特異性有較大影響。
4.引物延伸
引物延伸一般在72℃進行（Taq酶最適溫度）。但在擴增長度較短且退火溫度較高時，本步驟可省略延伸時間隨擴增片段長短而定，一般推薦在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生設定為1min/kbp。
5.循環數
大多數PCR含25-35循環，過多易產生非特異擴增。
6.最后延伸
在最后一個循環后，反應在72℃維持10-30分鐘．使引物延伸wan全，并使單鏈產物退火成雙鏈。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業自行提供，信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責，儀表網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示：為規避購買風險，建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。
