免疫熒光技術(shù)的實驗步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析，具有高效，特異性強，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)?？贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
DMEM（高糖），液體遠(yuǎn)志皂苷元L-(-)-半乳糖IRF-1(Ierferon regulatory factor-1)  干擾素調(diào)節(jié)因子抗原

萊苞迪甙A硫酸釓(III)IRAK 2  白介素-1受體相關(guān)激酶2

DMEM（高糖），液體黃芩苷4,6-二甲基嘧啶IL-1RA (Ierleukin-1 receptor aagonist)peptide  白介素-1受體拮抗劑抗原

DMEM（高糖），液體野黃芩苷（燈盞花乙素）(氯甲基)甲基二氯硅烷Iegrin a7(iegrin alpha 7)  整合素α7抗原

DMEM（高糖），干粉黃芩素(氯甲基)甲基二氯硅烷iegrin Beta1(ITG- Beta1/CD29)  粘附分子整合素β1抗原

秦皮素2-(2H-Tetrazol-5-yl)-Phenylboronic AcidIegrin Alpha5(ITG- AlphaV/CD49e)  粘附分子整合素α5抗原

DMEM（高糖），干粉秦皮甲素2-(2H-Tetrazol-5-yl)-Phenylboronic AcidIegrin alpha V/CD51 peptide  整合素αV抗原

秦皮乙素2-溴-1,3-二氟-5-JAK1(Tyrosine-protein kinase JAK1; Janus kinase 1)  蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗原

MAP1A/Mtap1a /FITC  熒光素標(biāo)記微管相關(guān)蛋白1AIgG胃癌多藥耐藥相關(guān)蛋白二酸單乙酯酰氯Porcine ADRP (Adipose Differeiation Related Protein) 檢測試劑盒

MAP1LC3A/FITC  熒光素標(biāo)記自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3IgG酪蛋白激酶casein kinase Iα二酸單乙酯酰氯Porcine HSP-27/HSPB1 (Heat Shock Protein 27) 檢測試劑盒

MAP-2/FITC  熒光素標(biāo)記微管相關(guān)蛋白2IgG磷酸化酪蛋白激酶casein kinase Iα(S)-(-)-2,2′,6,6′-四甲氧基-4,4′-雙(二基膦)-3,3′-聯(lián)吡啶Porcine PI3K2α (Phosphoinositide-3-Kinase Class-2-Alpha Polypeptide) 檢測試劑盒

Phospho-MAP2 (Ser136) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化微管相關(guān)蛋白2IgG磷酸化酪蛋白激酶casein kinase Iα(S)-(-)-2,2′,6,6′-四甲氧基-4,4′-雙(二基膦)-3,3′-聯(lián)吡啶Porcine PTHR2 (Parathyroid Hormone Receptor 2) 檢測試劑盒

Phospho-MAP2 (Thr1620/1623) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化微管相關(guān)蛋白2IgG肌動蛋白調(diào)節(jié)蛋白CAPGPitolisaPorcine GRN (Granulin) 檢測試劑盒

ERK1/MAPK3/FITC  熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶3IgGⅠ型膠原/1型膠原a12',3'-異叉腺苷Porcine GATA5 (GATA Binding Protein 5) 檢測試劑盒

MAPK4/FITC  熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶4IgGⅢ型膠原蛋白/膠原蛋白3/3型膠原蛋白2',3'-異叉腺苷Porcine TH (Tyrosine Hydroxylase) 檢測試劑盒

Phospho-MARCKS (Ser152/156) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化氨酸蛋白激酶C底物MarcksIgGCD962',3'-異叉鳥苷Porcine GMP-140 (Alpha-granular Membrane Protein) 檢測試劑盒
20號染色體開放閱讀框79抗體青色鏈霉Rat BMP-4 (Bone Morphogenetic Protein 4)  Kit

青霉Rat BMP-5 (Bone Morphogenetic Protein 5)  Kit

血桿Rat BMP-6 (Bone Morphogenetic Protein 6)  Kit

三葉膠灰星Rat BMP-7 (Bone Morphogenetic Protein 7)  Kit

假灰鏈霉Rat BMPR1A (Bone Morphogenetic Protein Receptor, type IA)  Kit

佛雷德里克斯堡假單胞Rat BMPR2 (Bone Morphogenetic Protein Receptor Ⅱ)  Kit

戴爾福特屬Rat BK (Bradykinin)  Kit

大腸埃希氏Rat ANG2 (Angiopoietin 2)  Kit